急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠cajal间质细胞的影响

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1、急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠Cajal间质细胞的影响【关键词】Cajal,间质细胞；KIT蛋白；小肠；腹膜炎　　［摘要］目的探讨豚鼠腹膜炎模型中小肠Cajal间质细胞网络的变化情况。方法利用腹腔内注射大肠杆菌和10%BaSO4肉汤佐剂的方法建立腹膜炎模型，冰冻切片和全层铺片并结合KIT免疫细胞化学染色观察。结果腹膜炎12～24h，腹膜炎症状最明显，在切片和铺片上均可见ICCs明显减少，其中ICMY减少最显著，48～96h后ICCs的数量逐渐恢复正常，同时豚鼠的腹膜炎反应也减轻甚至康复。结论小肠壁内ICCs在腹膜炎模型中可明显减少，但随着时间延长，ICCs逐渐

2、恢复正常的细胞网络。　　［关键词］Cajal间质细胞；KIT蛋白；小肠；腹膜炎　　EffectsofacutebacterialperitonitisoninterstitialcellsofCajalinintestinalwalloftheguineapigs　　Abstract:ObjectivesToinvestigatethechangesofinterstitialcellsofCajalnetworksintheguineapigsmodelofacutebacterialperitonitis.MethodsPeritonitismodel

3、swerecarriedoutbyinjectionofbacteriumcoliand10%BaSO4broth8adjuvant,ICCswereobservedonthefrozensectionsandwholemountpreparationwithKITimmunohistochemistry.Results12~24hoursafterperitonitis,symptomsofperitonitiswereobservedandICCsdecreasedobviouslyonbothfrozensectionsandwholemountpr

4、eparation,especiallyforICMY,while2~4dayslaterthenumberanddistributionofICCsrestoredtonormal.ConclusionAcutebacterialperitonitismightleadtotemporarylossofICCs,anditwouldbesoonrecovered.　　Keywords:interstitialcellsofCajal;KITprotein;intestine;peritonitis　　Cajal间质细胞(interstitialcells

5、ofcajal，ICCs)是100多年前Cajal应用镀银技术和甲基蓝染色，在豚鼠和家兔小肠内显示的一种特殊的间质细胞。在胃肠道根据其存在部位，一般分为4种亚型：ICMY位于环形和纵行平滑肌之间的肌间神经丛周围；ICIM位于环行和纵行平滑肌内；ICDMP位于靠近粘膜下层部位的环行平滑肌内的深部肌神经丛附近；ICSM位于结肠环行平滑肌层的内侧，紧靠粘膜下层的部位。不同亚型间ICCs的形态亦存在一定的差异，如ICMY有2个以上的细长突起，胞核椭圆，胞质较少；而ICDMP胞体细长，胞浆丰富［1］。目前已经证明ICCs是胃肠道自主节律性运动的起搏细胞和兴奋传导细胞

6、［2］，在调节消化管的运动功能方面具有重要作用［3］。8　　腹膜炎是临床上常见疾病，可由多种因素引起，并可导致严重的并发症，同时也包括了胃肠道运动障碍，如肠麻痹等。腹膜炎所引起强烈的炎症反应，可能导致慢波波幅和频率降低，但对胃肠道运动的起搏细胞-ICCs有怎样的作用，目前还尚不完全清楚。本研究采用大肠杆菌液腹腔内注射的方法建立腹膜炎模型，并作KIT免疫细胞化学染色，以观察Cajal细胞的变化。　　1材料与方法　　1.1实验动物分组及试剂　　45～60d龄豚鼠12只（第三军医大学实验动物中心提供），雌雄不限。实验动物分为4组：致腹膜炎后12h组、24h组、4

7、8h组和正常对照组，每组3只动物。主要试剂：KIT单克隆抗体（1∶100）购自eBIOSCIENCE公司，HRP标记的兔抗大鼠IgG抗体（1∶100）购自DAKO公司。　　1.2实验方法　　1.2.1腹膜炎动物模型建立实验前禁食12h，不禁水，大肠杆菌液（3×108）每100g体重18ml，结合10%BaSO4牛肉汤作佐剂每只1ml，无菌状态下，左下腹腹腔注射［4］。　　1.2.2免疫细胞化学染色在致腹膜炎后12h、24h、48h取相应部位小肠，经生理盐水冲洗后，OCT包埋，冰冻切片，片厚7～10μm，风干，100%丙酮固定30min（25℃）。染色方法为

8、间接酶标抗体法［5］。切片经0.01mol/LPBS充分漂洗后，0