急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠cajal间质细胞的影响

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1、急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠Cajal间质细胞的影响【关键词】Cajal,间质细胞;KIT蛋白;小肠;腹膜炎  [摘要]目的探讨豚鼠腹膜炎模型中小肠Cajal间质细胞网络的变化情况。方法利用腹腔内注射大肠杆菌和10%BaSO4肉汤佐剂的方法建立腹膜炎模型,冰冻切片和全层铺片并结合KIT免疫细胞化学染色观察。结果腹膜炎12~24h,腹膜炎症状最明显,在切片和铺片上均可见ICCs明显减少,其中ICMY减少最显著,48~96h后ICCs的数量逐渐恢复正常,同时豚鼠的腹膜炎反应也减轻甚至康复。结论小肠壁内ICCs在腹膜炎模型中可明显减少,但随着时间延长,ICCs逐渐

2、恢复正常的细胞网络。  [关键词]Cajal间质细胞;KIT蛋白;小肠;腹膜炎  EffectsofacutebacterialperitonitisoninterstitialcellsofCajalinintestinalwalloftheguineapigs  Abstract:ObjectivesToinvestigatethechangesofinterstitialcellsofCajalnetworksintheguineapigsmodelofacutebacterialperitonitis.MethodsPeritonitismodel

3、swerecarriedoutbyinjectionofbacteriumcoliand10%BaSO4broth8adjuvant,ICCswereobservedonthefrozensectionsandwholemountpreparationwithKITimmunohistochemistry.Results12~24hoursafterperitonitis,symptomsofperitonitiswereobservedandICCsdecreasedobviouslyonbothfrozensectionsandwholemountpr

4、eparation,especiallyforICMY,while2~4dayslaterthenumberanddistributionofICCsrestoredtonormal.ConclusionAcutebacterialperitonitismightleadtotemporarylossofICCs,anditwouldbesoonrecovered.  Keywords:interstitialcellsofCajal;KITprotein;intestine;peritonitis  Cajal间质细胞(interstitialcells

5、ofcajal,ICCs)是100多年前Cajal应用镀银技术和甲基蓝染色,在豚鼠和家兔小肠内显示的一种特殊的间质细胞。在胃肠道根据其存在部位,一般分为4种亚型:ICMY位于环形和纵行平滑肌之间的肌间神经丛周围;ICIM位于环行和纵行平滑肌内;ICDMP位于靠近粘膜下层部位的环行平滑肌内的深部肌神经丛附近;ICSM位于结肠环行平滑肌层的内侧,紧靠粘膜下层的部位。不同亚型间ICCs的形态亦存在一定的差异,如ICMY有2个以上的细长突起,胞核椭圆,胞质较少;而ICDMP胞体细长,胞浆丰富[1]。目前已经证明ICCs是胃肠道自主节律性运动的起搏细胞和兴奋传导细胞

6、[2],在调节消化管的运动功能方面具有重要作用[3]。8  腹膜炎是临床上常见疾病,可由多种因素引起,并可导致严重的并发症,同时也包括了胃肠道运动障碍,如肠麻痹等。腹膜炎所引起强烈的炎症反应,可能导致慢波波幅和频率降低,但对胃肠道运动的起搏细胞-ICCs有怎样的作用,目前还尚不完全清楚。本研究采用大肠杆菌液腹腔内注射的方法建立腹膜炎模型,并作KIT免疫细胞化学染色,以观察Cajal细胞的变化。  1材料与方法  1.1实验动物分组及试剂  45~60d龄豚鼠12只(第三军医大学实验动物中心提供),雌雄不限。实验动物分为4组:致腹膜炎后12h组、24h组、4

7、8h组和正常对照组,每组3只动物。主要试剂:KIT单克隆抗体(1∶100)购自eBIOSCIENCE公司,HRP标记的兔抗大鼠IgG抗体(1∶100)购自DAKO公司。  1.2实验方法  1.2.1腹膜炎动物模型建立实验前禁食12h,不禁水,大肠杆菌液(3×108)每100g体重18ml,结合10%BaSO4牛肉汤作佐剂每只1ml,无菌状态下,左下腹腹腔注射[4]。  1.2.2免疫细胞化学染色在致腹膜炎后12h、24h、48h取相应部位小肠,经生理盐水冲洗后,OCT包埋,冰冻切片,片厚7~10μm,风干,100%丙酮固定30min(25℃)。染色方法为

8、间接酶标抗体法[5]。切片经0.01mol/LPBS充分漂洗后,0

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