雌激素对紫外线作用下人永生化角质形成细胞的保护作用

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1、雌激素对紫外线作用下人永生化角质形成细胞的保护作用作者：仇金鹏李澄任明胡玉琳佟倜王艳姝【摘要】　　目的探讨雌二醇（17βE2）对中波紫外线（UVB）照射下人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的保护作用。方法将体外培养的HaCaT细胞随机分为3组：正常组、UVB组、E2组，分别加入不同的处理因素，UVB组在UVB灯下照射6min后继续培养，E2组照射前预先给予17βE2使其终浓度达107mol/L，正常组不加处理因素；照射结束后继续培养12h后收集细胞，测定各组细胞的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（

2、MDA）水平以及细胞内钙离子浓度和细胞线粒体膜电位的变化。结果与正常组比较，UVB组和E2组细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.05)，细胞内钙离子浓度显著升高(P<0.05)，SOD水平显著降低(P<0.05)，MDA水平显著升高(P<0.05)；与UVB组相比较，E2组细胞线粒体膜电位显著升高(P<0.05)，细胞内钙离子浓度差别不显著(P>0.05)，SOD水平显著升高(P<0.05)，MDA水平显著降低(P<0.05)。结论17βE2可通过抗氧化和抗凋

3、亡作用拮抗UVB引起的HaCaT细胞损伤，对UVB照射下的HaCaT细胞具有保护作用。【关键词】17β雌二醇；HaCaT细胞；中波紫外线(UVB)　　接触过多的紫外线可以使人类的皮肤癌、白内障等疾病的发病率升高。紫外线可以通过损伤皮肤细胞DNA，诱发自由基和细胞因子/炎症趋化因子的产生，产生脂质过氧化损伤对皮肤造成光损伤导致皮肤衰老甚至引发皮肤癌〔1～3〕。雌激素作为一种甾体类激素，可以通过影响皮肤厚度、湿度、弹性、血管供应、色素沉着来阻止皮肤老化，在抗皮肤衰老方面，有其独到之处〔4，5〕，有研究表明雌激

4、素可以抑制氧自由基(ROS)产生，减少氧化应激，具有一定的抗氧化和抗凋亡作用〔6〕，然而对于雌激素对人角质形成细胞(HaCaT细胞)是否具有保护作用，通过什么途径进行保护还知之甚少。因此，本实验预先用雌二醇（17βE2）处理HaCaT细胞来观察其对中波紫外线(UVB)照射导致细胞损伤的影响，探讨雌激素的作用机制，为研究皮肤光老化发生中17βE2的作用提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1材料与仪器　　RPMI1640培养基、胰蛋白酶（Gibco，美国）、台盼蓝（Amresco，美国）、MDA试剂盒（南

5、京建成）、DMSO（Sigma，北京鼎国分装，美国）、FACScan流式细胞仪（BectionDickinsonFACScalibur，美国）、生物显微镜（CH型，OLYMPUS，日本）、UVB灯（15（Biotium，美国）、罗丹明123（Sigma，美国）。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　HaCaT细胞在37℃、5%CO2条件下培养于含10%标准胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基中。当细胞融合至85%～90%时传代，弃掉培养液，PBS冲洗2遍，用0.25%胰酶常规消化，用含血清的培养液迅

6、速终止消化，制成单细胞悬液。细胞计数，按1×105接种于100mm培养皿中备用。　　1.2.2分组及处理　　当培养皿内细胞融合达60%左右时，将细胞随机分为正常组、UVB组、17βE2组。弃掉旧培养液，用高压灭菌的PBS冲洗3遍后，正常组和UVB组加入含1%FBS的10mlRPMI1640培养液，17βE2组加入5μl0.2mmol/L雌激素+含1%FBS的10mlRPMI1640培养液，放培养箱中继续培养24h后弃掉旧的培养液，用高压灭菌的PBS冲洗3遍，向每个平皿内加入4mlPBS，使之能浸没整个平

7、皿底。UVB组和17βE2组打开平皿盖在15I1640培养液于培养箱继续培养12h后收获各组细胞备用。　　1.2.3细胞内钙离子(［Ca2+］i)浓度测定　　将各组细胞常规消化后制成单细胞悬液，用PBS调整细胞计数至106个/ml。取含有5×105个细胞的悬液至1.5ml微量离心管中；向微量离心管中加入Fluo3/AMEster（终浓度5μmol/L），混匀；在37℃孵箱中避光反应45min后用PBS洗涤2次（1500r/min，5min）；在流式细胞仪（FCM）检测，检测条件为激发波长488nm、发射

8、波长530nm。　　1.2.4细胞线粒体膜电位（△Ψm）测定　　各组细胞消化后制成单细胞悬液，用PBS调整细胞计数至106个/ml。取含有5×105个细胞的上述细胞悬液至1.5ml微量离心管中；向微量离心管中加入Rh123（终浓度5mg/L），混匀；在37℃孵箱中避光反应45min后PBS洗涤细胞2次（1500r/min，5min）；在流式细胞仪（FCM）检测，检测条件为激发波长488nm、发射波长530nm。