茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜细胞保护作用的初步研究

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1、遵义医学院硕士学位论文茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜细胞保护作用的初步研究姓名：张迪申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：刘建国201205遵义医学院硕士学位论文茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜细胞保护作用的初步研究茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜细胞保护作用的初步研究硕士研究生导师张迪刘建国中文摘要茶多酚(TeaPolyphenols，TP)，又名茶单宁，是茶叶中多酚类物质的总称。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，约占总量的65％．80％。儿茶素主要成分为表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。有研究表明，TP能

2、够作为新型的天然抗氧化剂，同时兼有较强的抗炎和抑制免疫炎症反应的作用，具有增强机体抵抗力、抗肿瘤、抗氧化、防癌、抑菌、抗辐射、降血糖和血脂、预防心血管疾病、抗衰老等药理作用。银杏叶为银杏的干燥叶，其提取物(Ginkgobilobaextract，GBE)具有抗氧化、清除和抑制氧自由基、抗茵消炎、抗病毒等药理作用。随着药理作用机制的深入研究和药物提取工艺标准化的提出，这两种药物在口腔医学领域中也得到越来越广泛的应用，但其对牙周病的治疗机理尚不明确。人牙周膜细胞(Periodentalligamentcells，PDL

3、Cs)是牙周膜中起重要作用的功能细胞，能够合成胶原，参与牙周组织的新陈代谢，是牙周组织中新细胞发生的主要来源。目的：通过观察TP在脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)介导下单独和与GBE联合应用对体外培养人PDLCs增殖的影响以及TP对PDLCs分泌细胞因子的影响，研究TP和GBE对PDLCs的保护作用，初步探讨TP在慢性牙周病治疗中的作用机理，为将来在牙周病治疗方面开发和利用TP等药物提供理论依据和实验基础。方法：1．通过改良组织块培养法体外培养第5代人PDLCs，免疫组化鉴定细胞来源，苏木精一

4、伊红(Haematoxylin—eosinestain，HE)染色法观察细胞形态。2．用LPS刺激PDLCs，采用磺酰罗丹明B(SulforhodamineB，SRB)比色法观察各浓度梯度下的TP和TP与GBE联合应用对PDLCs的增殖和对LPS的抑制作用。3．酶联免疫吸附试验检测法观察不同浓度TP对LPS介导下人PDLCs分泌白细胞介素6(Interleukin一6，IL-6)、白细胞介素1p(Interleukin．1p，IL．1p)、肿瘤坏死因子11(TumorS遵义医学院硕士学位论文茶多酚对脂多糖介导下人牙

5、周膜细胞保护作用的初步研究——量曼量詈昌量曼曼曼量鲁量量曼曼曼詈曼曼曼曼曼曼曼量曼曼曼曼曼量曼量曼曼曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼量曼曼曼曼曼曼曼蔓曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼necrosisfaetoralpha，TNF．a)水平的影响。结果：1．通过体外原代培养的牙周膜，在第十天左右可见组织块周围有梭形细胞游出。经免疫组化鉴定：抗波形丝蛋白(VIM)阳性，抗细胞角蛋白(CK)阴性。2．LPS在浓度为100I-tg／ml时明显抑制细胞活性，2001．tg／ml的TP组对LPS抑制PDLCs增殖活性有拮抗作用，1001x

6、g／ml和5099／mlTP组对LPS抑制PDLCs增殖活性的拮抗作用不明显。3．TP与GBE联合应用可使细胞活性明显增强，TP和GBE组对LPS抑制PDLCs增殖活性有拮抗作用，TP能显著抑制LPS介导下PDLCs分泌IL一6、IL．113、TNF-0L的水平。结论：1．利用改良组织块培养法成功培养了人PDLCs，为本实验后续实验奠定基础。通过鉴定所培养细胞为来源于中胚层的细胞，而非上皮源性。2．不同浓度的耶对LPS抑制PDLCs增殖活性的拮抗作用可能不同，低浓度的TP组的拮抗作用不明显，在200I-tg／wa浓

7、度时拮抗作用较好。3．TP与GBE联合应用对LPS抑制PDLCs增殖活性有拮抗作用，TP抑制LPS介导PDLCs分泌IL．1B、IL．6、TNF．d。提示TP在抗炎作用方面的作用机制可能与抑制LPS刺激细胞产生IL．1B、IL．6、TNF．0【等炎症细胞因子有关。关键词：茶多酚；脂多糖；银杏叶提取物；人牙周膜细胞；白细胞介素一6；白细胞介素-113；肿瘤坏死因子．Ⅱ遵义医学院硕士学位论文茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜细胞保护作用的初步研究_。‘曼曼量曼昌璺量曼曼曼量曼量量皇曼曼曼曼鲁量曼鲁喜量皇曼曼曼曼量曼曼曼曼量曼

8、曼曼曼曼曼曼詈曼曼曼曼曼曼曼鲁曹鲁量量喜量曼曼曼曼曼曼曼曼■—舅量曼量曼曼曼皇童曼ExperimentalstudyofprotectiveeffectsofTPonhumanperiodontalligamentcellsinducedbyIippolySacCharideAbstractTeapolyphenols，alsocalledTeatatlni