反相高效液相色谱法测定绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁和槲皮素的含量

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1、反相高效液相色谱法测定绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁和槲皮素的含量作者：卢金清，喻樊，田耀平，肖波，陈黎，徐玉婷，詹晓莲【关键词】绞股蓝50%总皂苷提取物；,,芦丁；,,槲皮素；,,反相高效液相色谱法,　　摘要：目的建立绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁与槲皮素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱仪，使用TURNERKromasilTMC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.4%磷酸水溶液甲醇乙腈进行梯度洗脱，流速为0.5ml・min-1，检测波长为360nm；柱温为40℃。结果芦丁在0.37~3

2、.70μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999。槲皮素在0.05~0.50μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999；芦丁的平均加样回收率为99.2%，RSD为1.69%；槲皮素的平均加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。结论该方法简便快捷，准确度高。　　关键词：绞股蓝50%总皂苷提取物；芦丁；槲皮素；反相高效液相色谱法　　DeterminationofRutinandQuercetinin50%TotalGypenosideExtractionofGynostemmabyRPHPLC　　Abstract：Obje

3、ctiveTodeterminethemainflavonoidsrutinandquercetinin50%totalsaponinsofGynostemmabyRPHPLC.MethodsTheseparationedonTURNERKromasilTMC18column（250mm×4.6mm，5μm），themobilephaseconsistedof0.4%phosphoricacid-methanol-acetonitrile，l・min-1at40℃，theeasurement.ResultsThe

4、calibrationcurvesethodisaccurateandreproducible.　　Keyma;Rutin;Quercetin;RPHPLC　　绞股蓝(Gynostemma)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物。该属植物我国有14种和3变种［1］。现代药理学证明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用［2］。绞股蓝50%总皂苷提取物是总皂苷含量达50%的、一种适用于口服制剂生产的原料药，它具有很广的应用范围，故本文采用反相高效液相色谱法，可对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦

5、丁、槲皮素等成分进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，能为建立绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供依据。　　1仪器与试药　　DIONEXP680高效液相色谱仪（四元泵、Chromeleon色谱工作站、UVD170U检测器），AT201电子分析天平（d=0.01mg，瑞士），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080－9705）、槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号081－9003）；甲醇（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站）、乙腈（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站），其它试剂均为分析纯

6、，水为双蒸水。绞股蓝原50%总皂苷提取物由湖北中医学院中药制剂教研室提供。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为TURNERKromasilTM（4.6mm×250mm，5μm）；以0.4%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C；按表1进行梯度洗脱，检测波长为360nm；流速为0.5ml・min-1，柱温为40℃。理论板数按芦丁、槲皮素峰计算应不低于3000。色谱图见图1~4。　　表1梯度洗脱（略）　　图1芦丁对照品HPLC图谱（略）　　图2槲皮素对照品HPLC图谱（略）　　图3绞股蓝50%

7、总皂苷提取物供试品的HPLC图谱（略）　　图4空白溶剂图谱（略）　　2.2供试品溶液的制备取本品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，精密量取20ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.3对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.368mg的溶液，即得芦丁对照品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.0548mg的溶液，即得槲皮素对照品溶液。　　2

8、.4标准曲线的制备分别精密吸取芦丁、槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，结果见表1，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为：y=61.1945x+1.1004，r=0.99