rphplc法测定脑得生片中羟基红花黄色素a的

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1、RPHPLC法测定脑得生片中羟基红花黄色素A的【摘要】目的采用反相高效液相色谱法建立了测定脑得生片中羟基红花黄色素A含量的方法。方法采用超声波法提取，经大孔树脂HP20纯化后，以反相高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A的含量。色谱柱为PhenomenexLunaC18（5μm，3.9mm×150mm），流动相为甲醇乙腈0.7%磷酸溶液(体积比21∶5∶74)，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长403nm。结果羟基红花黄色素A在1.22～9.15μg/mL范围内线性关系良好，相关系数为0.9998。平均加样回收

2、率为100.93%，RSD为1.73%。结论该方法准确、专属性强、重复性好，可用于测定脑得生片中羟基红花黄色素A的含量。【关键词】脑得生片羟基红花黄色素A含量测定大孔树脂　　脑得生片由三七、川芎、红花、葛根和山楂等组成，具有活血化瘀、疏通经络、醒脑开窍之功效［1］。2005年版《中国药典》仅以三七皂苷为定量指标对脑得生片进行质量控制［1］。而红花作为该药的重要组成部分之一，其主要有效成分羟基红花黄色素A(hydroxylsaffloryellopoenexLunaC18(5μm，3.9mm×150mm)色谱柱；流动相为甲醇乙

3、腈0.7%磷酸(体积比21∶5∶74)；检测波长为403nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃。理论塔板数以羟基红花黄色素A计算不低于3000；分离度大于1.5；重复性RSD为1.58%；羟基红花黄色素A峰的拖尾因子为1.03。色谱图见图1。　　图1羟基红花黄色素A对照品（A），阴性对照（B），供试样品(C)色谱图（略）　　Fig.1HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A),negativereferencesubstanceHSYA(B)andsample（C）　　2.2溶

4、液的制备　　2．2.1对照品溶液的配制　　取羟基红花黄色素A对照品1.0mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加入30%（体积分数）甲醇5mL，超声溶解后，用30%（体积分数）甲醇定容至刻度。精密移取5.0mL，加30%（体积分数）甲醇稀释至10.0mL，揺匀，制得质量浓度为0.061mg·mL-1的对照品溶液，密封保存，备用。　　2．2.2供试品溶液的制备　　取脑得生片20片，去糖衣，研细。取1.0g，精密称定置具塞锥形瓶中，加入30%（体积分数）乙醇50mL，超声提取30min，滤过，滤液于50℃下减压回收至无醇味，然后加纯

5、净水20mL分散，水分散液过HP20型大孔树脂柱(内径1.5cm，长10cm)，以50mL水洗脱，弃去水液。再用30%（体积分数）乙醇洗脱，收集50mL，旋蒸仪浓缩至干，加30%（体积分数）甲醇溶解转移至25mL容量瓶中，用30%（体积分数）甲醇定容至刻度，揺匀，即得。　　2.2.3阴性对照溶液的制备　　按脑得生片处方比例制成不含红花的阴性对照样品，依“2.2.2”项方法制得阴性对照溶液。　　2．3阴性对照试验　　分别取供试品溶液，阴性对照溶液及对照品溶液，以10μL进样量，在色谱条件下进行测定，结果表明，阴性无干扰，见图1。

6、　　2．4线性范围　　精密吸取“2.2.1”项对照品溶液0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80mL，1.00mL，1.50mL，置10mL容量瓶中，以30%（体积分数）甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列浓度对照品溶液。分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定HSYA的峰面积，以对照品质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程为：A=5.07409×105ρ-3.2829×104，r=0.9998，结果表明HSYA在1.22～9.15μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系。　　2．5精密度试验　

7、　分别精密吸取同一批HSYA对照品溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件进样，平行测定6次，测得平均峰面积为3087600，RSD为2.16%。　　2．6稳定性试验　　取同一供试品溶液(批号为070302)，每2h进样1次，体积均为10μL，按“2.1”项下色谱条件测定6次，测得样品中HSYA的平均质量浓度为0.0427mg·mL-1，RSD%为0.87%。结果表明，供试品溶液在10h内稳定。　　2．7重复性试验　　取同一批号样品(批号为070302)，6份各约1g，精密称定，按“2.2.2”项制备供试品溶液，按“2.1”项色

8、谱条件测定。测得样品中HSYA的平均含量为1.0569mg·g-1，RSD为1.29%。结果表明，样品重复性良好。　　2．8加样回收率试验　　取6份已知含量的供试品1g，精密称量，置于具塞锥形瓶中，分别加入浓度为0.059mg/mL的HSYA对照品溶液10mL，照“2.2.2