针灸预处理对alzheimer大鼠wnt1表达的影响

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1、针灸预处理对Alzheimer大鼠Wnt1表达的影响【关键词】针灸；针刺预处理；老年性痴呆；ethodsAlltheratsal,sham,model,premoxibustion,preelectroacupuncture,preelectroacupunctureandmoxibustiongroupsatrandom.ResultsMLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶、dNTP、RNAsin；PCR引物及寡聚核苷酸；基因扩增仪；G6805Ⅱ型电针治疗仪。　　1.3动物模型制作和筛选　　大鼠称重，用10%的水合氯醛

2、（300mg/kg）腹腔注射麻醉后，固定于手术台上，脑立体定位仪固定头部。颅顶区备皮，剥开皮下筋膜暴露顶骨，消毒手术区皮肤，无菌操作，在两侧冠状缝后钻出小孔，取出碎骨屑，保持硬脑膜的完整。按大鼠脑立体定位图谱〔1〕选择大鼠海马区域进行注射。注射部位：前囟后3.5mm，中线外侧2.0mm，硬脑膜下2.7mm。每侧用微量注射器分别注入聚集肽的淀粉样蛋白（Aβ）2535（0.1%的三氟乙酸将Aβ2535稀释成5μg/μl，37℃孵育1in内注完，注射后留针5min，以免拔针时药物溢出。术后牙托粉封固颅骨孔，缝合皮肤，3d内每日肌注青

3、霉素G10万U防治感染。将大鼠分别进行Morris水迷宫测试，剔除天生痴呆大鼠。筛选方法：以15只3月龄青年大鼠为受试对象。第1天让大鼠自由游泳4次，每次2min以适应水中环境。从第2天起，每日上午和下午分别进行4次水迷宫实验，记录逃避潜伏期的长短，每次每只大鼠测试时间为2min，2min内未找到终点者以2min计算，4d实验结束后，得出青年大鼠平均逃避潜伏期。再取30只24月龄老年大鼠，时间及方法同前，并计算出每只老年大鼠的平均逃避潜伏期，分别以青年大鼠平均逃避潜伏期均值+2倍标准差值为下限、+1倍标准差值为上限作为评定标准，将

4、老年大鼠进行筛选，选出合格大鼠24只，每组各4只。取双侧海马，液氮中保存，备用。　　1.4处理方法　　正常组：不进行任何处理，作为实验对照组。假手术组：颅内注射等量生理盐水，手术方法及注药方法同模型组。模型组：造模成功后，不进行任何治疗。预电针组：对正常大鼠先施予电针刺激。根据华兴邦提供的大鼠穴位定位和针刺方法，取大鼠“百会”（顶骨正中）、“肾俞”（第2腰椎下两旁），百会向前平刺3～5mm，肾俞穴稍向内斜刺5mm，接上海产G6805Ⅱ型电针治疗仪，百会接负极，肾俞接正极，左右侧肾俞每日交替使用。选用连续波、频率2Hz，以针柄轻微抖

5、动为度，留针20min，1次/d，6d为1个疗程，疗程间休息1d，共3个疗程。电针结束当日即开始给大鼠脑室内注射Aβ2535，造模完毕7d后继续电针治疗7d。预艾灸组：正常大鼠造模前先给予艾灸刺激。艾灸方法：采用美容艾条（直径约0.6cm），取穴同预电针组，于“百会”和一侧“肾俞”上方2～3cm处用自制固定支架悬灸，左右侧肾俞每日交替使用，使穴位表皮温度在43℃±1℃，持续20min，1次/d，6d为1个疗程，疗程间休息1d，共3个疗程；施灸结束当日即开始给大鼠脑内注射Aβ2535，造模完毕7d后继续艾灸治疗7d。预电针加灸组

6、：对正常大鼠先施予预电针组与预艾灸组相同治疗方法，电针和艾灸各10min，可同时进行。治疗结束当日即开始给大鼠脑室内注射Aβ2535，造模完毕7d后继续电针加灸治疗7d。　　1.5标本采集　　每组中各取4只大鼠，以10%水合氯醛腹腔麻醉（300mg/kg），断头取脑，迅速在冰盘上剥离脑膜，除去嗅球、延髓和小脑，分离双侧海马，置于冰箱-80℃冻存备用。　　1.6用RTPCR检测脑组织MMMuLvReverseTanscriptase(200U/μl)1μl，42℃孵育20min，99℃5min，4℃5min，反应物-20℃保存

7、。　　1.6.2.4PCR产物琼脂糖凝胶电泳　　8μlPCR产物与1μl上样缓冲液混匀加样，1.5%琼脂糖凝胶电泳，100mV20～30min，溴化乙啶(EB)显色。　　1.7统计学处理　　所有数据应用SPSS13.0软件统计包处理。实验结果以x±s表示，组间比较采用t检验。　　2结果扩增倍数模型组(0.55±0.16)比正常组(1.0±0.33)和假手术组(0.95±0.36)显著降低，有极显著性差异（P＜0.01），预电针组(0.78±0.24)、预艾灸组(0.81±0.18)、预电针加灸组(0.93±0.20)与模型组比较均

8、有极显著性差异（P＜0.01），证实预电针、预艾灸、预电针加灸对于预防痴呆的发生发展具有明显的影响。预电针加灸组与预电针组和预艾灸组比较，有显著性差异（P＜0.05），证实针灸结合预处理效果最佳。　　3讨论〕.NeicPress,2005：8.