aps对p.acnes诱导的nf-κb信号通路及细胞因子il-1β、il-8及tnf-α的影响

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1、电子科技大学UNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINA硕士学位论文MASTERTHESIS论文题目APS对P.acnes诱导的NF-κB信号通路及细胞因子IL-1β、IL-8及TNF-α的影响学科专业生物医学工程学号201521210303作者姓名邓秋指导教师林新瑜教授分类号密级注1UDC学位论文APS对P.acnes诱导的NF-κB信号通路及细胞因子IL-1β、IL-8及TNF-α的影响（题名和副题名）邓秋（作者姓名）指导教师林新瑜教授指导教师电子科技大学成都（姓名、职称、单位名称）申请

2、学位级别硕士学科专业临床生理与技术提交论文日期2018.04论文答辩日期2018.05学位授予单位和日期电子科技大学2018.06答辩委员会主席评阅人注1：注明《国际十进分类法UDC》的类号。TheEffectofAPSonNF-κBSignalingPathwayandCytokineIL-1β、IL-8andTNF-αInducedbyP.acnesAMasterThesisSubmittedtoUniversityofElectronicScienceandTechnologyofChinaDiscipline:BiomedicalEng

3、ineeringAuthor:QiuDengSupervisor:XinyuLinSchool:SchoolofMedicine摘要摘要目的：探讨L-抗血酸-2-磷酸盐（L-ascorbyl-2-phosphate,APS）是否可以抑制痤疮丙酸杆菌（propionibacteriumacnes，P.acnes）诱导的核因子κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)信号通路，从而减少皮脂腺细胞分泌的细胞因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-

4、α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α），这样有助于我们更充分地了解痤疮炎性反应的作用机制，为痤疮的治疗提供一些新的思路。方法：1、SZ95人皮脂腺细胞的培养：复苏细胞，进行细胞培养传代，待细胞长到一定程度，冻存细胞。2、按照说明书活化并培养痤疮丙酸杆菌，挑取经鉴定为痤疮丙酸杆菌的菌落，用不同浓度的APS溶液配置成细菌悬浮液，每次现配现用。3、CCK8方法检测SZ95人皮脂腺细胞的增殖情况：加入不同浓度的APS后，24h后检测细胞增殖情况。4、使用P.acnes悬浮液刺激SZ95人皮脂腺细胞24h后，采用实时荧光定量核酸扩增

5、检测系统(real-timequantitativePCRdetectingsystem,RT-PCR)、酶联免疫方法（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测IL-1β、IL-8、TNF-α的表达情况，使用免疫印迹法(westernblot,WB)检测细胞质p-IκBα、细胞质以及细胞核NF-κBp65蛋白的表达情况。5、加入含有痤疮丙酸杆菌的不同浓度的APS溶液，24h后采用RT-PCR、ELISA方法检测IL-1β、IL-8、TNF-α的表达情况，WB检测细胞质p-IκBα、细胞质以及细胞核NF-κ

6、Bp65蛋白的表达情况。结果：1、复苏的SZ95人皮脂腺细胞培养4天左右，置于倒置相差显微镜下观察，发现细胞铺满培养瓶瓶底，沿着培养瓶贴壁生长，培养2到3天左右进行传代，一般传代后3天左右细胞长满培养瓶瓶底。2、在37℃的厌氧环境中，痤疮丙酸杆菌孵育48小时后，可见血平板上长出灰白色、形态较一致的菌落。3、APS的浓度在1.5625mmol/L–12.5mmol/L范围内，与SZ95人皮脂腺细胞共培养24h，可以促进SZ95人皮脂腺细胞的增殖，而APS的浓度在25mmol/L–200mmol/L范围内，可以抑制SZ95人皮脂腺细胞的增殖，统计学

7、上有显著性差异（P<0.01），因此在1.5625mmol/L–12.5mmol/L范围内筛选出适宜的APS浓度2.5mmol/L、5mmol/L和10mmol/L，且APS浓度越高，细胞的吸光度值越大，差异具有显著性意义（P<0.01）。4、P.acnes悬浮液刺激SZ95人皮脂腺细胞24h后，RT-PCR、ELISA方法检测SZ95人皮脂腺细胞产生的IL-1β、IL-8、TNF-α值较空白对照组均有不同程度增加，统计学上有显著性差异（P<0.01）；WB检测SZ95人皮脂腺细胞产生的细胞质p-IκBα、细胞核NF-κBp65蛋白表达升高，高

8、于空白对照组，而细胞质I摘要NF-κBp65蛋白的表达较空白对照组降低。5、含有痤疮丙酸杆菌的APS溶液共同处理SZ95人皮脂腺细胞后，RT-PCR法