杀念菌素高产菌株构建

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1、摘要杀念菌素是一种具有广谱抗真菌活性的七烯大环内酯类抗生素，产生于链霉菌FR一008(Streptomycessp．FR．008)或灰色链霉菌IMRU3570(StreptomycesgriseusIMRU3570)。本文以链霉菌FR．008的突变株ZYJ．6作为出发菌株，通过基因工程技术引入农业生物药物模型基因，如引入全局性正调节基因adpAc、前体物合成基因S．腺苷甲硫氨酸合成酶基因metK、透明颤菌血红蛋白基因vgb和敲除广泛性的抑制基因nsdA，研究了各个基因分别对杀念菌素合成的影响。结果表明：天蓝色链霉菌中

2、的adpA基因与metK基因在ZYJ．6中高效表达使杀念菌素的产量分别提高了lO％和40％；vgb基因的异源表达可以促进细胞的生长且杀念菌素的合成量提高了30％；nsdA基因的敲除对杀念菌素的合成没有影响。在此基础上又分析了两两基因整合对该抗真菌素产量的影响，结果在ZYJ．6引入metK，vgb整合基因或metK，adpA整合基因都可以进一步提高杀念菌素的合成量，与出发菌株相比，杀念菌素产量都提高了40％。根据上述结果，我们又构建了metK，vgb，门彩／4三个基因的整合表达载体，同时采用“核糖体工程技术”进行链霉素

3、、庆大霉素和利福霉素等的抗性突变株的筛选，获得了一株杀念菌素产量进一步提高了40％的链霉素抗性突变株STR．4。最终将metK，vgb，adpA整合基因在链霉素抗性突变株STR．4中进行高效表达，获得了能使杀念菌素产量提高了110％的高产菌株。本研究对于进一步建立高效表达农业生物药物的通用宿主系统，提高其他抗生素的异源表达量具有重要意义。关键词：链霉菌FR-008：杀念菌素；metK，vgb，adpA整合基因；nsdA基因；链霉素抗性基因突变株ConstructionofHigh．．yieldCandicidinPr

4、oducingStrainAbstractCandicidin，anantifungalheptaenemacrolidecompound，isproducedbyStreptomycesSp．FR一008orStreptomycesgriseusIMRU3570．TheoriginalstrainZYJ·6，amutantofStreptomycessp．FR．008，hadbeenintroducedintoaglobalpositiveregulatoradpAcgene、anS—adenosylmethion

5、inesynthetasegene(mettO、avgbgeneencodingVitreoscillahemoglobin(VHb)anddisruptedaglobalnegmiveregulatornsdAgene，tOinvestigatetherelationshipofeachgenewithcandicidinbiosynthesis．TheresultsindicatedthatoverexpressionofadpAcandmetKgeneinZYJ一6showeda10％and40％increas

6、einthecandicidinproductivity,respectively．ExpressionofVitreoscillahemoglobinenhancedgrowthandshoweda30％increaseinthecandicidinproductivity．DisruptionofnsdApinStreptomycessp．FR．008hadnoeffectoncandicidinbiosynthesis．Furtherresearchwastoanalysetheeffectoftwointeg

7、ralgeneoncandicidinproductivity,theywerebothshoweda40％increaseinthecandicidinproductivitywhenmetK，vgbintegralgeneormetK，adpAintegralgenewasexpressedinZYJ·6，respectively．SoweconstructedanexpressionvectorofmetK，vgb，adpAintegralgene．Andweadoptedthe‘"RibosomeEngine

8、ering’’methodofstreptomycin—resistant、gentamicin—resistant、rifamycin—resistantmutationalscreeningofhigh—yieldcandicidinstrain，acquiredastreptomycin—resistantmutantSTR_4which