低氧预适应对移植肝内胆管的显微及超微结构的影响

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1、低氧预适应对移植肝内胆管的显微及超微结构的影响作者：张培建　周斌　金成　李勇　田田　冯敏　刘新颜　卜平【摘要】目的：探讨移植肝内胆管的显微和超微结构的变化以及低氧预适应的保护作用。方法：建立大鼠自体原位肝移植模型，30只SD大鼠随机分为3组，A组：自体原位肝移植组；B组：低氧预适应后行自体原位肝移植组；C组：假手术组。术后48h取材，检测各组血清胆红素水平，光学显微镜下观察各组胆管上皮细胞的显微结构，透射电子显微镜下观察肝内毛细胆管的超微结构。结果：A组血清胆红素水平比B组升高更明显（P<0.01）；光学显微镜下，A组与B组相比，胆管上皮细胞损伤严

2、重，细胞排列缺失明显，炎性细胞浸润增加；电子显微镜下，A组与B组相比，肝内毛细胆管管腔扩张明显，微绒毛肿胀、数量减少或消失的情况严重，胆汁淤积程度明显。结论：低氧预适应对移植肝内胆管具有显著的保护作用。【关键词】细胞低氧·移植物·胆管，肝内·显微结构·超微结构【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatethechangeofthemicro-andultramicro-structureofintrahepaticbileductafterlivergraftandtheprotectionofhypoxicprecondition

3、ing.Methods:Themodeloforthotopicautologouslivertransplantationlydividedintothreegroups.A:orthotopicautologouslivertransplantationgroup;B:hypoxicpreconditioningbeforeoperationgroup;C:shamoperationgroup.Theserumbilirubin,themicro-structureofbiliaryepithelialcellandtheultramicro-str

4、uctureofcholangioleinedinthreegroupsafter48hoursafteroperation.Results:Asparedbilirubinincreased（P<0.05）;thebiliaryepithelialcellagedandinflammatorycellinfiltrated;thecholangioleicrovillioreobviouslyingroupA.Conclusion:Themicro-andultramicro-structureofintrahepaticbileductafte

5、rlivergraftin［5］，然后行自体原位肝移植；C组：假手术组，仅行开腹，分离肝门部即关腹。各组于术后48h迅速取材。1.2　动物模型的制备　大鼠自体原位肝移植参照赵宏峰等［6］的模型并进行改进，具体步骤如下。1）乙醚半开放式面罩吸入麻醉，术前10min肌肉注射阿托品0.03mg，仰卧位固定。2）取正中切口进腹，进腹后逆时针游离肝周韧带。然后游离肝上腔静脉（suprahepaticvenacava,SVC）、肝下腔静脉（inferiorvenacava,IVC）。解剖第一肝门，游离肝动脉，从肠系膜下静脉和脾静脉汇合处游离门静脉（portalvEi

6、n,PV）至肝门部，并将PV壁鞘膜分离干净。3）在肠系膜上静脉及脾静脉汇合处上无损伤血管夹，轻轻向上向后提起血管夹，用4号针头刺入PV,并用无损伤血管夹固定穿刺针，推入肝素盐水约3mL，使肝脏内的血液进入体循环，准备进行冷灌注。4）冷灌注前分别在肝动脉、SVC、IVC上无损伤血管夹，并在IVC血管夹稍上方静脉壁剪开约1mm缺口作流出道。然后经PV穿刺处灌注4℃含肝素的乳酸林格液，在灌注的同时不断用4℃乳酸林格液浇注肝脏表面降温。直至肝脏逐渐变成土黄色时停止灌注。5）灌注完成后拔出穿刺针，用prolene缝线修补PV穿刺点和IVC流出道，并预松血管夹查看修

7、补是否成功，成功后分别松开PV、SVC、IVC及肝动脉的无损伤血管夹，使肝脏复流，结束无肝期。同时用38℃生理盐水20mL浇注肝脏表面以快速复温。6）关腹，38℃恒温箱清洁饲养。1.3　观测指标及方法　1）心脏取血以全自动生化分析仪测定血清总胆红素（totalbilirubin，TBIL）、直接胆红素（directbilirubin，DBIL）和间接胆红素（indirectbilirubin,IBIL）。2）肝内胆管的显微结构：动物取血后立即处死，迅速切取肝左叶，取5mm×10mm大小置于10%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋制片，HE染色，光学显微镜观察并

8、采集图像。3）肝内毛细胆管的超微结构：动物取血后立即处死，迅速切取肝左叶，取1m