nf-κb参和低氧预适应对自体原位肝移植大鼠jnk通路影响

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1、孟中良：NF—rd3参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响第一部分弟一部分NF．1(B参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响摘要1、目的：本实验采用自制的“-经I'1静脉灌注法白体原位肝移植模型”，术前予大鼠低氧预适应(hypoxiapreconditioning，HP)处理，通过观察术后不同时段肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平及相应肝功能的变化；细胞色素C、Cleaved-Caspase一3蛋白表达：肝组织p—C．JUNmRNA、NF．r,BmRNA含量；肝脏光镜、电镜下的

2、改变；研究低氧预适应作用后肝细胞凋亡改变，并分析肝脏缺血再灌注损伤过程中NF．vd3在JNK信号传导通路调节肝细胞凋亡中的作用；更进一步的探索低氧预适应法减轻肝细胞凋亡的确切机制。2、方法：2．1将96只SD大鼠，雌雄不拘，以简单随机化法均分为3组：①正常对照组(NC)：仅进腹分离不夹闭血管，不作其他处理。②自体移植组(AT)：行自体原位肝移植。③低氧预适应组fliP)：移植前用体积分数8％氮氧混合气体行低氧预处理90rain，然后行自体原位肝移植。2．2各组大鼠均在术后1、2、12、24h处死，经

3、腔静脉采血3ml检测血清ALT、AST水平，硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别检测大鼠肝组织超氧化物歧化酶、丙二醛水平，免疫组织化学染色法测定细胞色素C表达，Westernblot法检测Cleaved—Caspase-3蛋白表达，RT-PCR检测p—C—JUNmRNA、NF·r,BmRNA水平，并在光学显微镜、透射电子显微镜下观察各组肝细胞形态学改变。3、结果：3．1实验动物数量分析所有大鼠均进入结果分析，每组32只，各组1，2，12，24h每个时间段各取8只检测。移植成功的标准是移植结束后，大

4、鼠即刻苏醒，翻身，并能维持有效呼吸、心跳。——————鱼丛型塑IIYIIIIIl2]1110111411111911111511121111L1磐．一23．2各组大鼠术后不同时相点血清ALT和AST水平比较低氧预适应组的血清ALT和AST水平显著低于自体移植组组，但均显著高于正常对照组，差异有统计学意义妒

5、植组比较，低氧预适应组肝组织丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高，差异有统计学意义(尸<0．05)3．4各组大鼠术后不同时相点肝组织细胞色素C蛋白的表达低氧预适应组各时段细胞色素C蛋白阳性表达明显低于自体移植组，但均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0．05)3．5各组大鼠术后不同时相点肝脏组织中Cleaved．Caspase．3蛋白表达情况各时相自体移植组和低氧预适应组Cleaved．Caspase．3蛋白表达水平较正常对照组显著升高(砌．05)，术后12h达到峰值，低氧预适应组

6、Cleaved—Caspase一3蛋白表达水平较自体肝移植组显著下降(P<0．05)。3．6各组大鼠术后不同时相点肝脏组织中P—C．JUNmRNA表达情况P．C—JUNmRNA表达水平于术后lh即开始升高，2h达到峰值，随后下降。术后1h、2h、12h自体移植组和低氧预适应组P．C．JUNmRNA表达水平较正常对照组显著升高(尸0．

7、05)。3．7各组大鼠术后不同时相点肝组织NF．诏mRNA的含量NF．r,BmRNA含量于移植后lh即开始升高，12h达到峰值，随后数值下降，与正常对照组比较，两移植组各时相肝组织NF．r,BmRNA含量显著升高，差异具有统计学意义(尸<0．05)；与自体移植组比较，低氧预适应组肝组织NF．r．BmRNA含量显著升高，差异具有统计学意义(P<0．05)3．8各组大鼠术后肝组织显微结构的变化孟中良：NF一心参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响光镜下，自体肝移植组各时段中央静脉周围的肝细胞

8、明显肿胀，肝血窦变窄，而肝细胞之间的间隙变宽。低氧预适应组的肝小叶结构基本正常，肝组织无明显改变。3．9各组大鼠术后肝组织超微结构的变化自体移植组1h时段的肝细胞超微结构未见明显改变；2h时段，肝细胞间隙变大，线粒体肿胀明显；12h段肝细胞浓缩，可见细胞核裂解，染色质粗糙，核仁浓缩，线粒体嵴疏松溶解，双层膜模糊不清；24h时段，肝细胞呈现固缩死亡的形态，染色质边集，少数肝细胞内出现凋亡小体。与自体移植组相比，低氧预适应组各时段的肝细胞未见有明显的凋亡形态，仅部分线粒体