nf-κb参和低氧预适应对自体原位肝移植大鼠jnk通路影响

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1、孟中良:NF—rd3参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响第一部分弟一部分NF.1(B参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响摘要1、目的:本实验采用自制的“-经I'1静脉灌注法白体原位肝移植模型”,术前予大鼠低氧预适应(hypoxiapreconditioning,HP)处理,通过观察术后不同时段肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平及相应肝功能的变化;细胞色素C、Cleaved-Caspase一3蛋白表达:肝组织p—C.JUNmRNA、NF.r,BmRNA含量;肝脏光镜、电镜下的

2、改变;研究低氧预适应作用后肝细胞凋亡改变,并分析肝脏缺血再灌注损伤过程中NF.vd3在JNK信号传导通路调节肝细胞凋亡中的作用;更进一步的探索低氧预适应法减轻肝细胞凋亡的确切机制。2、方法:2.1将96只SD大鼠,雌雄不拘,以简单随机化法均分为3组:①正常对照组(NC):仅进腹分离不夹闭血管,不作其他处理。②自体移植组(AT):行自体原位肝移植。③低氧预适应组fliP):移植前用体积分数8%氮氧混合气体行低氧预处理90rain,然后行自体原位肝移植。2.2各组大鼠均在术后1、2、12、24h处死,经

3、腔静脉采血3ml检测血清ALT、AST水平,硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别检测大鼠肝组织超氧化物歧化酶、丙二醛水平,免疫组织化学染色法测定细胞色素C表达,Westernblot法检测Cleaved—Caspase-3蛋白表达,RT-PCR检测p—C—JUNmRNA、NF·r,BmRNA水平,并在光学显微镜、透射电子显微镜下观察各组肝细胞形态学改变。3、结果:3.1实验动物数量分析所有大鼠均进入结果分析,每组32只,各组1,2,12,24h每个时间段各取8只检测。移植成功的标准是移植结束后,大

4、鼠即刻苏醒,翻身,并能维持有效呼吸、心跳。——————鱼丛型塑IIYIIIIIl2]1110111411111911111511121111L1磐.一23.2各组大鼠术后不同时相点血清ALT和AST水平比较低氧预适应组的血清ALT和AST水平显著低于自体移植组组,但均显著高于正常对照组,差异有统计学意义妒

5、植组比较,低氧预适应组肝组织丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高,差异有统计学意义(尸<0.05)3.4各组大鼠术后不同时相点肝组织细胞色素C蛋白的表达低氧预适应组各时段细胞色素C蛋白阳性表达明显低于自体移植组,但均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)3.5各组大鼠术后不同时相点肝脏组织中Cleaved.Caspase.3蛋白表达情况各时相自体移植组和低氧预适应组Cleaved.Caspase.3蛋白表达水平较正常对照组显著升高(砌.05),术后12h达到峰值,低氧预适应组

6、Cleaved—Caspase一3蛋白表达水平较自体肝移植组显著下降(P<0.05)。3.6各组大鼠术后不同时相点肝脏组织中P—C.JUNmRNA表达情况P.C—JUNmRNA表达水平于术后lh即开始升高,2h达到峰值,随后下降。术后1h、2h、12h自体移植组和低氧预适应组P.C.JUNmRNA表达水平较正常对照组显著升高(尸0.

7、05)。3.7各组大鼠术后不同时相点肝组织NF.诏mRNA的含量NF.r,BmRNA含量于移植后lh即开始升高,12h达到峰值,随后数值下降,与正常对照组比较,两移植组各时相肝组织NF.r,BmRNA含量显著升高,差异具有统计学意义(尸<0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组肝组织NF.r.BmRNA含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)3.8各组大鼠术后肝组织显微结构的变化孟中良:NF一心参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响光镜下,自体肝移植组各时段中央静脉周围的肝细胞

8、明显肿胀,肝血窦变窄,而肝细胞之间的间隙变宽。低氧预适应组的肝小叶结构基本正常,肝组织无明显改变。3.9各组大鼠术后肝组织超微结构的变化自体移植组1h时段的肝细胞超微结构未见明显改变;2h时段,肝细胞间隙变大,线粒体肿胀明显;12h段肝细胞浓缩,可见细胞核裂解,染色质粗糙,核仁浓缩,线粒体嵴疏松溶解,双层膜模糊不清;24h时段,肝细胞呈现固缩死亡的形态,染色质边集,少数肝细胞内出现凋亡小体。与自体移植组相比,低氧预适应组各时段的肝细胞未见有明显的凋亡形态,仅部分线粒体

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