间充质干细胞肾包膜下注射对甘油所致急性肾损伤的保护作用

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1、间充质干细胞肾包膜下注射对甘油所致急性肾损伤的保护作用张威1,21京东誉美屮西医结合肾病医院肾脏病科河北省三河市065201;2解放军总医院肾脏病科北京100853【摘要】目的:观察肾包膜K注射间充质干细胞对甘油所致急性肾损伤小鼠肾脏的保护作用。方法：健康雄性C57BL/6小鼠(8-12周龄)30只，随机分为3组:Sham+NS(normalsaline)组：肾包膜卜生理盐水注射组；RM(rhabdomyolysis)+NS组：甘油肌肉注射加肾包膜卜主.理盐水注射组；RM+MSCs(mesenchymalstemcells)组：

2、甘油肌肉注射加MSCs肾包膜K注射组。RM+NS和RM+MSCs组给予双后肢肌肉注射50%甘油生理盐水8ml/kg。甘油肌肉注射造模3d后检测血肌酐、妞素氮等，行肾脏病理PAS染色检查。结果：RM+NS组小鼠血肌酌尿素氮、较Sham组明显升高，出现肾小管损伤；MSCs治疗组小鼠血肌酐、尿素氮较模型组降低(P<0.05),肾小管损伤明显减轻。结论：肾包膜1注射间充质干细胞对甘油诱导小鼠急性肾损伤具有保护作用。【关键词】急性肾损伤；间充质干细胞；肾包膜【屮图分类号】R692【文献标识码】A【文章编号】2096-0867(20

3、16)-2-367-02前言急性肾衰竭是由肾小球滤过率急骤卜降导致体内血肌酐、尿素氮等代谢物积聚，引起相应临床表现的综合征，是临床常见的危重急症。横纹肌溶解是指横纹肌细胞的完整性受到损害，肌细胞A的成分释放进入细胞外液和血液循环［1］。急性肾损伤(acutekidneyinjury,AKI)是横纹肌溶解的严重并发症［2】。甘油为高渗性物质，在肌肉注射甘油后即可引起局部肌肉坏死以及红细胞溶解，肌红蛋白和血红蛋白分子量小，容易通过肾小球滤过进入肾小管，造成严重的肾小管损伤［3］。通过给小鼠肌肉注射甘油建立AKI动物模型，可用于模拟临

4、床上横纹肌溶解并发的AKI,甘油所致肾损伤模型是一个较为成熟的AKI动物模型。肾包膜下移植，是上世纪八十年代以来发展起来的一种预测人体肿瘤对化疗药物敏感性的实验方法。肾包膜下冇丰富的血管床/注射的细胞能够很快的被周围的血管吸收［4】。骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)为骨髓中一类具有多向分化潜能的多能干细胞,其可向多种造血以外的组织迁移、定居、分化,用于损伤修复［5］。我们利用MSCs可参与损伤肾组织修复的特性，结合肾包膜下细胞注射移植技术，观察MSCs对甘油所致AKI小鼠肾脏的保护作用。材料

5、与方法1.实验动物雄性C57BL/6小鼠(8-12周龄)购自军事医学科学院实验动物中心，动物室保持12h昼夜循环，室温控制在19"C〜29°C，湿度40%〜70%,小鼠自由摄取水和食物。所有动物实验前在动物室适应性培养1周。2.建立模型和实验分组健康雄性C57BL/6小鼠(8-12周龄)30只，随机分为3组:Sham+NS(normalsaline)组：双侧肾包膜下生理盐水注射组；RM(rhabdomyolysis)+NS组：甘油肌肉注射加双侧肾包膜下生理盐水注射组；RM+MSCs(mesenchymalstemcells)组：

6、甘油肌肉注射加MSCs双侧肾包膜下注射组，每只小鼠肾包膜下注射约5×106MSCso每组10只，限水不限食24h，Sham组给予双后肢肌肉注射生理盐水8ml/kg,其余3组给予双后肢肌肉注射50%甘油生理盐水8ml/kg(甘油购自美国Amresco公司)。在甘油注射完的72h,处死小鼠，留取血及肾组织标本，以便进-步研究。3.细胞的培养C57BL/6骨髓来源的MSCs购自赛业生物科技宥限公司。MSCs在37°C,5%CO2,90%的湿度条件孵箱中进行培养，用MSC生长专用培养基(赛业公司)进行培养，传代到第6

7、到8代吋用于实验。4.观察血肌酐、尿素氮变化腹主动脉采血，放于促凝管中，颠倒混匀，室温静置40〜120min，3000r/min离心lOmin，分离上层血清，全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮。5.肾脏组织学检查将肾组织固定于10%福尔马林液中，常规脱水、石蜡包埋，行PAS染色。组织学检查采用盲法。急性肾小管坏死的严重程度进行评估，200倍光镜下随机选取10个视野，记录每个视野细胞坏死、刷状缘脱落、管型形成、管腔扩张的小管站该视野小管数的百分比，进行评估对比观察。1.统汁学方法数据以(x±SEM)表示，采用SPS

8、S20.0软件对数据进行单因素方差分析，方差齐者用LSD检验，方差不齐者用Games—Howell检验，P<0.05被认为差异具有统计学意义。结果1.一般情况Sham组反应灵敏，精神良好，进食进水正常，尿液颜色正常；RM+NS组，小鼠反疲迟钝，精神萎靡，1〜4h