川芎茶调颗粒膜分离工艺及hplc特征图谱分析

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1、贵阳中医学院硕士学位论文引言川芎茶调颗粒原方出自于宋《太平惠民和剂局方》，具有疏风止痛作用，用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。此方主要由川1芎、荆芥、防风、细辛、白芷、羌活、薄荷、甘草组成【11。据报道川芎茶调颗粒具有抗血小板凝聚，缓解小血管痉挛，改善心脑组织供血供氧，从而达到活血化瘀，活络通脉，疏风止痛之功效。可适用于血管性、神经性、紧张性、颈椎病等引起的各种头痛及偏头痛；适用于风寒感冒、恶寒、发热、鼻塞及鼻窦炎等病症。预防脑溢血发作，脑血栓形成以及改善脑血管疾病后遗症(缺血性脑血管疾病，脑溢血后遗

2、症等)。J目前，川芎茶调颗粒为“国家基本药物目录”收载品种，国家药典委员会于2011年公布其标准草案，其中新增6项鉴别项及阿魏酸和甘草酸的含量测定。川芎茶调颗粒含有8味药，每一味药均具有多种成分，如仅以阿魏酸和甘草酸的含量判断川芎茶调颗粒的质量好坏则会以偏概全，难以体现川芎茶调颗粒内在化学物质的联系。随着色谱技术的发展，中药指纹图谱的出现为制定中药的质量标准提供新的思路，本项目对川芎茶调颗粒进行特征图谱研究，利用这一分析的“眼睛”，探究川芎茶调颗粒中内在化学成分的联系及变化，为川芎茶调颗粒制定更科学的质

3、量标准提供一定的实验依据。在川芎茶调颗粒生产过程中，各味药的提取和浓缩为传统工艺加热浓缩，此技术广泛应用于现代中药制剂生产中，但其生产周期长，耗能大，给生产带来不便，特别是能耗大的缺点不符合现在国家节能减耗的能源战略。鉴于此，本实验对川芎茶调颗粒进行提取工艺的对比研究，引进膜分离技术，利用人工制备的具有选择透过性能的高分子薄膜对煎煮液进行工艺研究。通过与传统工艺生产的川芎茶调提取物进行质量对比，为膜分离技术应用于川芎茶调颗粒提取工艺的产业化奠定一定的实验基础。贵阳中医学院硕士学位论文第一部分川芎茶调颗粒

4、HPLC特征图谱研究在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药特征图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。有美国FDA最近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法科．Guidanceoflndusty：BotanicalDrug(Draft)．2000Augus0。川芎茶调颗粒含有多味药，如果仅以一两项含量测定来判断其质量优劣是不能客观，特征图谱所具有的整体性，模糊性的特点，为川芎茶调颗粒质量控制的研究提供一定的实验思路。1．仪器与试药Agilentl

5、l00高效液相色谱仪(四元梯度泵、自动进样器、DAD检测器、Chemstation色谱工作站)，80．2台式低速离心机，AGl35型电子天平(梅特勒．托利多公司)，CH．250型超声波清洗机(天津恒奥科技公司，功率250W，频率33kHz)；甘草酸铵(中国药品生物制品检定所，批号为110731．201116)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA)；正丁醇(分析纯，天津市光复科技发展有限公司)；甲醇(分析纯，上海振兴化工一厂)；娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团)，其余试剂均为分析纯。中药色谱指纹图谱相似度评价体系(

6、2004A版)。2色谱条件的考察2．1流动相的考察流动相的酸碱度也是影响特征图谱的重要因素，在反相色谱中流动相中加入酸、碱，使流动相的pH值控制在一定范围，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾，改善峰形，以提高分离的选择性。采用5～100％有机相60min线性洗脱的方式，本实验考察了甲醇．水、乙腈．水、乙腈．0．05％甲酸、甲醇．0．02％磷酸、乙腈．0．02％磷酸、乙腈．0．02％-一乙胺。贵阳中医学院硕士学位论文甲醇．水mAU1∞∞40甲醇-0．02％磷酸51}{4A眈，、，儿n以。u。l心i，删i沁¨、

7、趴沁～人也从j。—————r—～r——r—]——1—一T—r一一——r一—r一—r一一—r一20304050一，·ji胎p、川m“学』，；上贵阳中医学院硕士学位论文图1-1流动相系统的色谱图由以上图谱可以看出，乙腈．0．05％甲酸出峰数最多，柱效较高，且基线较为平整，故选此流动相系统。2．2梯度的选择本研究在进行此部分工作时，进行了深入细致的考察，最终取得了良好的效果。通过对梯度洗脱过程的不断优化，使色谱图中的特征峰具有适宜的保留时间，并且各个特征峰之间具有良好的分离度，在保证谱图效果的同时兼顾了分析样

8、品的效率。最终，色谱条件和色谱图如下，即为最终确定的建立特征图谱的梯度洗脱条件。该梯度的梯度变化少，因此具有很好的重现性。表1-1最终优化的流动相洗脱梯度时间(min)乙腈(％)’0．05％甲酸(％)05958528721004555贵阳中医学院硕士学位论文105505。135653554】1i；l3I。～沁，j。抓且。√Lk凡A√L，札∥如凡砧～刈i虬⋯⋯～～～j406080100120m耐图1．2最终优化的洗脱色谱图2．3色谱柱的选择色