乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物ph敏感型脂质体的研究

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1、乳糖化．去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体的研究中文摘要中文提要目的：合成乳糖化．去甲斑蝥素(1actosyl．norcantharitin，Lac-NCTD)磷脂复合物，从而提高Lac-NCTD的脂溶性，将其通过逆向蒸发法制备脂质体，并利用羧甲基壳聚糖(carboxymethylchitosan，CMCT)与脂质体表面的静电吸附作用，制备Lac-NCTD磷脂复合物pH敏感型脂质体，以期其在弱酸性的肿瘤部位主动释药，增强Lac-NCTD的抗肿瘤活性。方法：(1)通过溶剂蒸发法合成Lac-NCTD磷脂复合物，以复合率为指标，考察反应溶剂、Lac-N

2、CTD投药浓度、Lac-NCTD与磷脂投料比、反应温度、反应时间对复合率的影响，通过单因素和正交试验设计优化制备工艺，红外光谱分析(FT-IR)、差示扫描量热分析(DSC)Ffl]核磁共振分析(1H-NMR)表征磷脂复合物结构，测定磷脂复合物的表观油水分配系数，通过高效液相色谱(HPLC)考察磷脂复合物的性质。(2)分别以Lac-NCTD和Lac-NCTD磷脂复合物为原料药，分别采用逆向薄膜蒸发法蒸发法和逆向蒸发法制备脂质体，通过均匀设计优化脂质体制备工艺，考察脂质体包封率、载药量、粒径分布及Zeta电位。(3)通过CMCT与Lac-NCTD磷脂复

3、合物脂质体表面的静电吸附作用，使CMCT包裹在脂质体表面，制得pH敏感型脂质体，并考察其与未包裹CMCT的脂质体在不同介质中的体外释放性质，与Lac-NCTD脂质体的释放特性进行比较。(4)通过MTT法考察Lac．NCTD、两种空白脂质体与两种载药脂质体对人体肝癌细胞HepG2的细胞毒作用。(5)采用HPLC法评价HepG2细胞对Lac．NCTD及其脂质体的摄取过程。(6)建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察脂质体在体内抗肿瘤活性。(7)通过荧光染料Cy．7分子结构中的羧基与羧甲基壳聚糖中的伯胺发生反应，用Cy．7标记CMCT，制备Cy．7荧光标记的

4、pH敏感型乳糖化．去甲斑蝥素磷脂复合物脂质体，通过小动物活体成像仪，采集荧光信号，考察该脂质体在小鼠体内的靶向性。结果：(1)Lac．NCTD磷脂复合物的复合率为97．2±2．01％，其表观油水分配系数为Lac-NCTD的135倍，脂溶性显著改善。FT-IR、DSC及1H．NMR表征磷脂复合物结构得，磷脂复合物是由氢键缔合产生的复合物，其不同于药物与磷脂的普通物理混合物；HPLC检测结果显示Lac．NCTD磷脂复合物具有与Lac-NCTD相中文摘要乳糖化．去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体的研究同的保留时间，表明磷脂复合物也不是一种全新化合物。(

5、2)磷脂复合物脂质体的平均包封率为70．00±1．30％，载药量为2．24±0．43％，平均粒径为47．18±4．16nm，粒径跨距为O．70±0．07，Zeta电位为．26．O±2．97IIlV，电镜显示其形态圆整；Lac-NCTD脂质体包封率为38．12±1．12％，载药量为1．22±0．21％，平均粒径为83．14±9．64rim，粒径跨距为0．63±0．07，Zeta电位为．11．04-2．42mV。(3)Lac-NCTD脂质体体外释药符合Higuchi方程；pH敏感型脂质体体外释药符合Weibull方程，并且在pH5．9～7．4的介质中表

6、现出显著的pH依赖性和爆破释放效应。(4)与Lac-NCTD、Lac-NCTD脂质体相比，pH敏感型脂质体在体外对肿瘤细胞HepG2的亲和性更好，细胞毒作用更显著。(5)体内抑瘤实验表明，pH敏感型脂质体可以更好地抑制H22肿瘤的生长，保护免疫器官。(6)pn敏感型脂质体可以靶向聚积在小鼠肝脏和肿瘤部位，有很好的靶向作用，从而减小药物毒副作用，提高抗肿瘤效果。结论：优化的药物磷脂复合物制备工艺简单易行，成本低，复合率高，可以显著提高药物脂溶性，从而提高其在脂质体中的包封率，羧甲基壳聚糖包裹的脂质体体外释药有显著的pH敏感性，可以在呈弱酸性的肿瘤部位

7、主动释药，并对肝脏肿瘤部位具有靶向性，从而表现出更好的抗肿瘤作用。关键词：乳糖化．去甲斑蝥素；磷脂复合物；脂质体；pH敏感性；肝靶向作者：周奕指导教师：张学农StudyonpH--sensitiveliposomesloadedwithlactosyl--norcantharitinphospholipidscomplexAbstractobjective：Toprepareliposomesloadedwithlactosyl-norcantharitinphospholipidcomplexes(LPC)，inwhichsoybcallphos

8、phatidylcholinewasusedtoimprovetheliposolubilityoflactosyl—no