解淀粉芽孢杆菌antica菌株抗污损生物的研究.pdf

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1、解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究谨以此论文献给我敬爱的导师和家人------宋博II 解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究学位论文完成日期：2014.3.21指导教师签字：答辩委员会成员签字：III 解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或

2、证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本

3、学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：签字日期：年月日年月日IV 解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究摘要海洋污损生物对海上平台和航海设备造成了很大的危害，严重阻碍人类海上经济和军事活动。大量研究发现，海洋生物污损的关键环节是由于污损微生物的附着引起的，因此，研究具有抗微生物附着作用的防污剂具有重要意义。早期的防污剂因毒性大、难降解等缺陷已逐渐被限制使用，而天然产物防污剂具有无毒害、对环境友好等优点

4、，目前已经成为研究的热点。然而许多天然活性产物产量低、制备成本高、稳定性差，因此亟需寻找产量高、成本低和性质稳定的抗污损生物防污剂。解淀粉芽孢杆菌可以产生多种活性物质，抑菌谱广，且生产过程简便、产量高、活性物质稳定性强，已经引起人们的广泛重视。本实验室分离得到一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciensanti-CA），研究发现该菌株对常见污损细菌如蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）、鳗弧菌（Vibrioanguillarum）、灿烂弧菌（V.splendidus）、哈维氏弧菌（V.harveyi）、交替假单胞菌（Pseudoalte

5、romonassp.）和铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）均具有显著的抑菌活性。采用薄层层析（TLC）、柱层析、高效液相色谱分析（HPLC）和质谱分析（MS）对解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株发酵产物中的活性成分进行了分离纯化和结构分析，结果表明其活性成分为5个分子量分别为993、1008、1021、1035和1049的化合物。又通过液质联用（HPLC-MS）和二级质谱技术分析该组化合物的碎片峰，然后查询文献对比发现，该组化合物为一系列分子量分别相差14的环脂肽同系物，其结构由7个氨基酸残基组成的七肽环和侧链分别为相差1个C原子的脂肪烃链组成，且

6、脂肪酸参与成环。属于表面活性素类（surfactin）环脂肽，命名为环脂肽6-2，发酵实验表明，该化合物产量约为0.6g/L。采用结晶紫染色法和共聚焦扫描显微镜（CLSM）方法研究了环脂肽6-2对V 解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究污损细菌生物膜形成的抑制和清除活性，结果表明其可以有效抑制铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）PAO1菌株和蜡样芽孢杆菌（B.cereus）生物膜的形成。有研究表明，生物膜中的多糖类成分对生物膜的形成有重要作用，采用荧光定量PCR方法测试了P.aeruginosaPAO1菌株的多糖合成关键基因PslC的表达水平发现环脂肽6

7、-2可以降低PslC基因的表达量，表明该化合物对PAO1菌株的多糖合成具有抑制作用，进而影响到其生物膜的形成。海带和藤壶也是引起海洋生物污损的重要生物，研究了环脂肽6-2抑制海带孢子萌发活性和对藤壶幼虫的毒性，结果表明，环脂肽6-2可以有效抑制海带孢子的萌发，抑制效果为EC50=0.11mg/mL，对藤壶幼虫也有一定的毒性，LC50=2.1mg/mL。进行了实地挂板实验，结果表明环脂肽6-2含量为12.0%时的挂板具有一定的抗污损生物的效果。关键词：解淀粉芽孢杆菌；环脂肽；抑菌；细菌生物膜；海洋污损生物。VI 解淀粉芽孢杆菌anti-CA