解淀粉芽孢杆菌y19微生物菌肥的研制及其生物效益研究

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1、分类号：密级：UDC：编号：2012210240硕士学位论文解淀粉芽孢杆菌Y19微生物菌肥的研制及其生物效益研究DevelopmentofMicrobialFertilizerandBiologicalEffectofBacillusamyloliquefaciensY19硕士研究生：蒋晓玲指导教师：何月秋教授申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学培养学院：植物保护学院二〇一五年五月TCLC:Secrecy:UDC:No.:2012210240DevelopmentofMicrobialFertilizerandBiologicalEffectof

2、BacillusamyloliquefaciensY19AThesisSubmittedtoYunnanAgriculturalUniversityInSpecialFulfillmentoftheRequirementfortheMasterDegreeofPlantPathologyCandidate:JiangXiaolingSupervisor:Prof.HEYueqiuKeyLaboratoryofPlantPathologyofYunnanProvinceYunnanAgriculturalUniversityKunming650201

3、，CHINAMay2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得云南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解云南农业大学有关保存、使用学位论文的管理办法及规定，即：云南农业大学有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印

4、或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意云南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目前，农业生产上提高作物单产及防控病虫害的主要方式为增施化肥及使用化学农药。然而它们在保障粮食增产的同时，也引发了环境污染，生态平衡破坏及食品安全等问题。微生物菌肥已被证实具有提高作物产量且能减轻病害的危害程度，因此，开展有益微生物筛选并开发成微生物菌肥的研究工作具有重要的意义。本研究围绕筛选促生长防病的生防菌株、生防菌微生物菌肥的开发及其生物效益等

5、方面开展研究，获得了如下结果：1.通过本实验室先前分离并保存的几株玉米内生细菌的IAA合成、固氮解磷活性及盆栽玉米叶片叶绿素含量的测定，筛选出具有良好应用潜力的内生细菌。结果发现解淀粉芽孢杆菌Y19菌株合成IAA的能力和固氮解磷活性均优于Y13和Y10菌株，盆栽玉米的叶绿素含量也更高。因此，将菌株Y19作为后续研究的供试菌株。2.通过自然转化方式，将含有绿色荧光蛋白基因gfpmut3a的质粒pHAPII导入Y19，获得具有良好荧光表型的标记菌株Y19-GFPmut3a。室内平板对峙、玉米盆栽促生定殖试验的结果表明，质粒的引入对Y19的拮抗病原及促生

6、效果并无明显的影响。在温室玉米盆栽试验中，激光共聚焦显微镜观察结果显示，接菌后的第9天，可观察到其在玉米根、茎及叶部组织的定殖；接种后的第100d，仍能在玉米、茄子、白菜的根际土壤、根、茎及叶组织中检测到标记菌株。这些结果表明Y19在不同植物体内具有良好的定殖及运输性能。63.使用含有终浓度为0.03%黄原胶的Y19-GFPmut3a（10CFU/mL）发酵液6喷施烟草叶面，和(或)直接使用Y19-GFPmut3a（10CFU/mL）发酵液进行灌根处理，结果表明灌根和叶面喷施的双重处理组中烟草的株高、鲜重和干重明显增加。接种后的第30天，仍能在烟草

7、中检测到标记菌株，这表明Y19在烟草体内具有良好的定殖能力，且Y19的定殖并不影响烟草叶内及叶表的细菌种类和数量。4.菌株Y19分别与实验室保存的促生防病效果显著的解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2、具有溶磷活性的洋葱伯克氏菌1-2、YN201305分别两两混合培养的结果表明彼此之间无拮抗作用。在此基础上以单独培养的发酵液为对照，将上述I的两两混合培养后的发酵液分别与基质复配（体积质量比为1:2）后，种植玉米、萝卜、白菜和油菜。试验结果表明，单一的Y19发酵液与基质复配促生长效果最好。65.将Y19发酵液（10CFU/mL）与不同含量的氮肥、磷肥或钾肥

8、的基质均匀混合后，用于漂浮育苗水稻和盆栽玉米的促生试验。结果发现Y19发酵液与含有3~4%的磷肥的基质复配的促生长效果最好