化学发光免疫分析法检测丙型肝炎抗体的临床评价

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1、化学发光免疫分析法检测丙型肝炎抗体的临床评价万大朋1刘胜武21.武汉市普爱医院检验科，湖北武汉430033；2.武汉大学基础医学院，湖北武汉430071[摘要]目的分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的应用价值。方法同时应用化学发光法和酶联免疫吸附法检测60例丙肝确诊感染者和100例健康体检者的抗丙型肝炎病毒抗体，计算其阴性符合率、阳性符合率以及总符合率，用Kappa检验计算待评价诊断一致性。选取化学发光法初检验结果为阳性的标本100例，按照S/CO.值分为低值组（1<S/CO.<8）和高值组（S/CO.≥8），经抗HCV经重组

2、免疫印迹试验（RIBA）对化学发光法试剂的检测界限值进行评估。结果ELISA法与化学发光法检测HCV抗体结果阳性符合率：87.7%，阴性符合率：91.3%，总符合率：90.0%，Kappa系数为0.760，两者具有高度的一致性，两种方法在常规临床检测中并无明显差异。阳性低值组中12份标本经RIBA试剂确证为阳性，而高值组中44份标本确证为阳性。结论ELISA是目前HCV抗体筛查中较为常用的方法，其试剂盒多为第三代试剂，特异性较好，化学发光法近期在HCV抗体筛查中逐渐得到重视，其试剂的灵敏度较高，两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。化学发光法的阳性判定标

3、准应进行评估，以提高特异性。.jyqkeryville，CA。1．3检测结果判断ELISA法:以（0.1×阳性对照平均A值+阴性对照平均A值）确定Cut-off值，以检测值≥Cut-off值为阳性。CLIA法:S/CO.值≥1为阳性。确认试验：出现2条以上HCV蛋白条带为阳性。1．4方法同时用ELISA法和CLIA法对160份样本进行抗HCV抗体检测，按说明书进行操作。另选取100份化学发光法初检结果阳性的标本，分为两组：低值组（1＜S/CO.＜8）和高值组（S/CO.≥8）。对两者结果不符的样本用免疫印记法试剂（HCVRIBA）再次进行确认，以再确

4、认结果为正确。1．5统计方法用四格表统计临床数据，并计算阴性、阳性以及总符合率，所得数据采用统计学软件SPSS17.0处理，样本率以χ2检验。用Kappa检验计算发光法试剂与ELISA试剂的诊断一致性，按照Kappa系数大小以极差、微弱、弱、中度、高度和极强对诊断一致性强度进行判断，极差：Kappa系数＜0；微弱：Kappa系数0～0.2；弱：Kappa系数0.21～0.4；中度：Kappa系数0.41～0.6；高度：Kappa系数0.61～0.8；极强：Kappa系数0.81～1.0[2]。2结果2．1ELISA和CLIA方法检测丙型肝炎病毒抗体结

5、果的符合性结果显示使用传统ELISA试剂与化学发光方法试剂检测抗HCV抗体的诊断一致性较高，临床检测中差异有统计学意义(P＜0.05）。见表1。2．2化学发光法抗-HCV初检阳性标本的RIBA确认试验结果见表2。3讨论目前广泛使用的第三代HCV抗体ELISA试剂增加了HCVNs5区表达的蛋白作为抗原，大增加了灵敏度和特异性。但临床使用该类试剂筛检HCV感染者，仍存在一定数量的假阳性和假阴性结果[3]，特别是在HCV低流行率人群中，如无偿献血者，假阳性问题一直比较突出。此外，国内常用的HCV抗体酶免试剂皆没有灰区的设定，试剂盒cutoff值计算方法各厂

6、家也都不一致，导致国产试剂盒之间的检测性能存在较大的异质性，亦是假阳性比较多的原因[4-5]。在临床实验室中检验中，需先对使用的方法和程程序进行评估，确定其符合要求后才可正式使用。Kappa检验是用于分析计数资料和等级分组资料一致性检验中的一种方法，在肝炎病毒血清标志物等二分变量（阴性、阳性）检测中，一般选择使用使用检验法，以判断不同方法学是否存在一致性及相关程度。该文结果显示化学发光法与酶联免疫法在丙型肝炎病毒抗体检测中的Kappa系数达到0.76，具有高度一致性，与同类研究报道结果基本一致[4]，结果表明两种试剂均可用于血源筛查、临床术前初筛。E

7、LISA试剂的特异性较好，发光试剂的灵敏度较高，两种试剂均存在漏检现象，实际工作中如能联合应用可提高检出率[6]。另外该研究参照美国CDC丙型肝炎实验导则[7]，使用S/CO.≥8可判断为阳性作为分组依据，对发光法初筛阳性的标本再进行RIBA确认试验，发现低值组的阳性率为24%，而高值组的阳性率为88%，提示中国人群的抗HCV阳性预测值与美国有一定的差异，目前的抗-HCV诊断试剂盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易发生变异，其基因呈现高度异质性，编码氨基酸序列明显改变，可引起抗原性的改变，现阶段试剂的检测抗原多为2型抗原，而以往的研究发

8、现，我国HCV患者多为1型，因此当前的试剂并不适用于中国所有地区[4]。提示实验室应对抗HCV试剂的S/CO