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1、当归注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌I【摘要】目的：观察当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞内ICAM-1表达的变化，探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。方法:将35只SD大鼠随机分成4组(n=10):正常对照组(n=5)；假手术组(n=10)；缺血再灌注组(n=10)；当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后，将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色；观察各组动物心肌细胞内p53蛋白表达的变化。利用HPIAS-2000图像分析系统测定ICAM-1在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：正常对照组心肌
2、细胞内ICAM-1表达低呈阴性；当归治疗组心肌细胞内ICAM-1表达较低呈阴性。假手术组心肌细胞内ICAM-1表达也较低呈弱阳性，缺血再灌注损伤组ICAM-1表达较高呈阳性。图像分析结果显示：正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间ICAM-1表达的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01)；正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间ICAM-1表达的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞有重要的保护作用。【关键词】当归注射液缺血再灌注心肌I
3、CAM-1表达缺血是供血障碍引起的组织供血不足的病理表现,组织缺血导致的疾病称缺血性疾病,是可以发生在多种组织器官上的常见疾病。再灌注是指组织缺血后恢复供血的过程,缺血再灌注实际上包括缺血和再灌注两个方面,缺血是引起疾病的原因,也是再灌注的条件。缺血性疾病的治疗需要改善供血,改善供血的过程又是再灌注的过程,往往可以加重组织的损伤［1］。当归的药用价值早已为人们所认识,其药理作用主要是：①促进机体免疫；②对呼吸系统的作用；③对血液循环系统的作用，有文献报道［2］。冠心病患者应用当归注射液治疗能平衡和抑制血小板聚集的作用。因而能明显改善胸痛、胸闷等临床症
4、状和心电图缺血性ST-T的变化,是治疗冠心病的有效药物［3］。当归具有钙通道阻滞作用,拮抗钙超载,对心肌缺血再灌注所致心肌损伤有保护作用。在缺血及再灌注状态下,心脏顺应性及射血功能得到良好的保护,使反映心肌损伤程度的CPK活性和氧自由基损伤过程产生的过氧化脂质分解产物MDA的浓度大大降低［4］。中药对心肌缺血的治疗有其独特性和有效性，尤其是中药具有毒副作用小、效果确切的特点。近年来，有不少学者对中药预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用进行了研究与探索。本实验采用免疫组织化学方法观察当归注射液对缺血/再灌注过程心肌的保护作用,研究当归注射液抗心肌缺血/
5、再灌注损伤的作用机理。旨在指导临床合理应用当归治疗心血管疾病,开辟当归在体外循环手术前和术中应用的新途径。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1动物模型制备及分组 选用健康雄性-1单克隆抗体，即用型S-P通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸。以上试剂均购于北京中山生物技术有限公司。 1.3方法 1.3.1常规HE染色 取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。 1.3.2免疫组织化学S-P法检测ICAM-1相关抗原 主要步骤：5μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，I
6、CAM-1均采用高压抗原修复，正常羊血清处理10min以减少非特异性背景，一抗4℃孵育过夜，生物素标记的二抗处理10min，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物处理10min，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组，人乳腺癌作为ICAM-1的阳性对照组。 1.4免疫组织化学结果判断ICAM-1以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对ICAM-1抗原的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个高倍镜
7、视野(×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.5统计学处理对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和q检验，检验水准α为0.05。 2结果 2.1HE染色正常对照组：可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，细胞核位于细胞中央，细胞界限清晰，结构正常；假手术组：可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，但可见部分胞浆溶解，结构基本上正常；缺血再灌注损伤组：可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，胞浆溶解呈空泡或网状，细胞
8、界限模糊，可见心肌细胞断裂；当归治疗组：可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，细胞核呈椭圆形位于中央，细胞结构基本
