高氟对小鼠磨牙牙胚发育的影响

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1、高氟对小鼠磨牙牙胚发育的影响【关键词】牙胚发育；氟中毒；磨牙ABSTRACT:ObjectiveTostudythetoothgermdevelopmentofmousemolarinfluorosis.MethodsID等[3]的方法。通过预实验，筛选出对小鼠既有毒性作用又不致死的剂量10mg/kgNaF用作实验剂量。60只怀孕昆明种小鼠(第四军医大学中心动物实验室提供)，孕期为9.5d时，体重平均(40±1.0)g，随机分为2组。实验组孕鼠30只，腹腔注射10mg/kgNaF/次(西安化学试剂厂生产)；对照组小鼠30只，腹腔注射等量的生理盐水。隔6h1次，每天2次，连续注射3

2、d。常规饲料喂养和自来水饮水。1.2标本制备在孕期13.5d(E13.5)、15.5d(E15.5)、18.5d(E18.5)、出生后1d(PN1)、3d(PN3)、5d(PN5)、7d(PN7)，上述7个时间点取胎鼠及新生小鼠头部，40g/L多聚甲醛4℃固定24h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，冠状定位制备5μm连续切片。每间隔5片取1片，贴于经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，用于HE染色。应用常规的光学显微镜观察小鼠下颌第一磨牙牙胚HE染色。2结果E13.5实验组：牙板上皮在出牙点未见形成圆形或卵圆形上皮芽。对照组：磨牙牙胚处于蕾状期。牙板上皮在出牙点形成圆形或卵圆形上皮芽

3、，成釉器细胞，呈立方或矮柱状，胞核大，胞质少。其下方和周围的外胚间充质细胞在成釉器头端明显增殖，密集在一起包绕着上皮芽。E15.5实验组：磨牙牙胚处于蕾状期。牙板上皮在出牙点形成圆形或卵圆形上皮芽，成釉器细胞，呈立方或矮柱状，胞核小，染色深。对照组：磨牙牙胚处于帽状期。成釉器分为三层：外釉上皮层、内釉上皮层和星网状层。成釉器下方的球形细胞凝聚区是牙乳头，包绕成釉器和牙乳头边缘的外胚间充质细胞，密集成结缔组织是牙囊。E18.5实验组：磨牙牙胚处于帽状期。成釉器为外釉上皮层、星网层、内釉上皮层三层结构。核深染(图1A)。对照组：磨牙牙胚处于钟状形态发生期。成釉器为外釉上皮层、星网层、

4、中间层、内釉上皮层四层结构。内釉上皮细胞沿基底膜整齐排列(图2A)。PN3实验组：磨牙牙胚处于钟状分化期。与同期对照组相比，前成釉细胞变短，部分细胞极性消失，细胞之间出现裂隙，排列紊乱(图1C)。对照组：磨牙牙胚处于钟状分泌期。内釉上皮细胞进一步分化为成釉细胞呈长柱状，细胞进一步极化，胞核位于远离基底膜的一端，成釉细胞紧密相连，整齐排列(图2C)。PN5实验组：磨牙牙胚处于钟状分泌期。与同期对照组相比，部分成釉细胞之间裂隙加重，极性消失，排列更加紊乱。少数成釉细胞与基底膜分离(图1D)。对照组：磨牙牙胚处于钟状成熟期。内釉上皮完全极化。在基底膜的内侧，有前期牙本质、牙本质形成。已

5、形成的牙本质外表面有牙釉质形成(图2D)。PN7实验组：磨牙牙胚处于钟状成熟期。成釉细胞与釉质之间多处出现空泡，使成釉细胞与釉质分离。对照组：牙釉质、牙本质进一步形成、矿化。此外，实验组成釉器的外釉上皮层、星网层、中间层以及牙乳头细胞、成牙本质细胞与对照组相比，细胞形态及排列未见明显改变。3讨论本实验发现，过量氟的摄入可使磨牙发育明显延迟。对照组磨牙发育为钟状期时，实验组仍处于帽状期。出生后，对照组已有牙本质、牙釉质形成，而同期实验组发育滞后。推测过量氟可能干扰了发育中的牙胚上皮和外胚间充质之间的相互作用。本实验观察到对照组小鼠磨牙牙胚从E15.5d到PN7d内釉上皮细胞经过一系

6、列复杂的分化发育过程后达到终末分化细胞，即成釉细胞。分泌期成釉细胞经历了从分泌前期成釉细胞、分泌早期成釉细胞、分泌末期成釉细胞的转变。PN1d磨牙牙胚处于钟状分化期，分泌前期成釉细胞处于增殖分化。PN3d磨牙牙胚处于钟状分泌期，分泌期成釉细胞的特征是细胞呈高柱状，细胞核远离基底膜，呈典型的极性倒置，成釉细胞的远端出现功能性的突起——托姆氏突起(Tomesprocess)。Tomes突起的形成是分泌期成釉细胞的特征，细胞合成和分泌的釉基质沿着Tomes突起不断沉积。而此时期实验组结果显示过量氟对钟状分化、分泌期成釉细胞的细胞形态产生了强的影响。成釉细胞变矮，部分细胞失去正常的紧密相

7、连，细胞之间出现裂隙；细胞极性消失，细胞排列紊乱。成釉细胞处于成熟期，成釉细胞与釉质之间多处出现空泡，使成釉细胞与釉质分离，牙尖处可见成釉细胞下囊腔形成。由于细胞处于高分化和分泌状态，对任何刺激都非常敏感。所以过量氟使受损的分泌期成釉细胞变短、极性消失，出现细胞排列紊乱，Tomes突起变短或消失。正常釉柱和柱间质结构丧失，甚至引起成釉细胞下囊腔的形成。因此，分泌期成釉细胞失去了正常的分泌功能，导致釉基质分泌减少或停止。在萌出后受损的成釉细胞相应位置的牙面上出现釉质发育不全性缺损，