表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂zd1839对宫

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1、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对宫【摘要】目的探讨选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对宫颈癌细胞的作用。方法以宫颈鳞癌Siha细胞，腺癌Hela细胞为研究对象，利用MTT法检测ZD1839单药使用以及与顺铂联用分别对Siha和Hela细胞的增殖抑制作用。采用Burgi法分析联合用药的效果，并用流式细胞仪检测Siha和Hela细胞的细胞周期分布及凋亡率改变。结果单独使用ZD1839能够抑制Siha、Hela细胞的增殖，其IC50值分别是1.48μmol/L、2.67μmol/L，而且抑制作用呈剂量依赖性。ZD1839能增强顺铂对Si

2、ha、Hela细胞的抑制作用，Burgi修正公式所得Q值分别为1.06±0.03（Siha）、1.13±0.01（Hela）。ZD1839使G0/G1期细胞增加，S期细胞减少，细胞凋亡率增加。结论ZD1839能够抑制宫颈癌细胞的增殖，并且能够增强顺铂对宫颈癌细胞的抑制作用，该抑制作用可能与其使肿瘤细胞停滞于G1期和诱导肿瘤细胞的凋亡有关。【关键词】宫颈癌；ZD1839；细胞增殖；细胞周期；凋亡宫颈癌发病率占女性生殖器官恶性肿瘤的首位。目前，放射治疗是其主要治疗方法，但疗效并不令人满意。为进一步提高其疗效，人们研究包括顺铂等化疗药物在内的综合治疗手段，虽然取得了

3、一定的疗效，但严重的毒副作用限制了其应用。ZD1839是一种新开发的可供口服的选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，已被美国FDA批准用于晚期非小细胞肺癌的治疗。由于宫颈癌细胞存在表皮生长因子受体的高表达，阳性表达率达90%以上［1］。我们推测针对表皮生长因子受体靶点的特异性抑制剂ZD1839，可能对其会有一定的治疗效果，因此，我们以宫颈鳞癌Siha细胞，腺癌Hela细胞为研究对象，通过体外研究试图探讨ZD1839对宫颈癌细胞的作用及其可能机制。1材料与方法1.1药物及试剂ZD1839由英国阿斯利康（AstraZeneca）公司提供，顺铂、四甲基偶氮哇蓝(

4、MTT)、二甲基亚砜（DMSO）购自美国Sigma公司，RPMI1640购自美国Gibco公司，胎牛血清购自浙江民海公司。1.2细胞及培养宫颈癌Siha、Hela细胞株为同济医院肿瘤科实验室冻存；细胞培养在含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的RPMI1640的培养液中，放置于37℃5%CO2的温箱中培养。1.3MTT实验取对数生长期细胞制成1.5×104/ml细胞悬液，接种96孔板，每孔200μl（即3×103个细胞/孔）。置于培养箱中培养。待细胞贴壁2h后，吸弃旧培养液，加入各受试物继续培养24h后，每孔加MTT液20μl(5m

5、g/μl)，继续孵育4h，吸弃每孔培养液，加入150μlDMSO，用酶联仪以波长570nm测定各孔A值。实验设药物处理组、细胞对照组和空白对照组，每组均设3个复孔。药物处理组在铺孔10h后加入含不同浓度药物的20μl培养液；细胞对照组加入200μl培养液;空白对照组在铺孔时不加细胞悬液，只加200μl培养液。在单药对Siha、Hela增殖抑制作用的实验中，药物处理组加入ZD1839的终浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10、50和100μmol/L。在ZD1839与顺铂联用对Hela、Siha细胞抑制作用的实验中，分别检测了0.1、

6、0.5、1.0、5.0μmol/L和10μmol/L的ZD1839与0.5、1、2、5和10μg/ml的顺铂联用对Hela、Siha细胞的抑制作用。实验重复3次，取3次实验结果的平均值作为实验结果。按下列公式计算肿瘤细胞增殖抑制率：肿瘤细胞增殖抑制率（%）＝（1－药物处理组A值-空白对照组A值细胞对照组A值-空白对照组A值）×100%1.4Borgi法分析联合用药效果根据细胞增殖实验测得ZD1839和顺铂的IC50值，各取ZD1839和顺铂的IC50值的半量单药或两药联合作用于Siha、Hela细胞，利用MTT法测得抑制率，并按下列公式计算Q值，判断两种药物联

7、合作用的效应。Q＝平均E（A/2+B/2）平均EA/2+平均EB/2平均EA/2为1/2IC50值的ZD1839组抑制率，平均EB/2为1/2IC50值的顺铂组抑制率，平均E(A/2十B/2)为各取ZD1839和顺铂IC50值的半量两药联合作用的抑制率。Q>1为增强，Q=1为相加，Q<1为拮抗。上述实验重复3次，取平均Q值为实验结果。1.5流式细胞术分析细胞周期分布及细胞凋亡情况取药物处理组及对照组细胞各约1×106个，用PBS缓冲液洗2次后，以-20℃预冷的80%乙醇溶液于4℃冰箱中固定过夜。将固定好的细胞1000r/min离心5min，弃去上清

8、液，PBS缓冲液漂洗两次，将细胞悬液移