hplc法探测复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量

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1、HPLC法探测复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量摘要:目的建立复方灵芝颗粒中五味子甲素含量测定的方法。方法用高效液相色谱法测定，色谱条件为：C18柱，(5μm,250×4.6mm)，流动相为甲醇水(体积比75∶25)，检测波长为254nm。结果五味子甲素在0.1608～6.432μg范围内呈现良好的线性关系(R=09996)，平均加样回收率为99.27%，RSD=1.02%(n=6)。结论该法操作简便、准确，重复性好，建立的定量方法可用于复方灵芝颗粒质量的控制。关键词:HPLC;复方灵芝颗粒;五味子甲素Abstract:Obj

2、iectiveToestablishamethodforthecontentdeterminationofdeoxyschizandrininplexLingzhigranule.MethodsHPLCedonanODS-C18column(5μm,250mm×4.6mm)usingmethanolobilephaseunderthedetection.ResultsThelinearrangeofdeoxyschizandrineanrecoveryethodissimple,reproducibleandaccurat

3、eforthecontentdeterminationofdeoxyschizandrininplexLingzhigranule.Key,250mm×4.6mm);检测波长：254nm;流动相：甲醇-水(75∶25),流速：1mL・min-1;进样量10μL;柱温：30℃。取一定浓度样品进行测定，此条件下所测五味子甲素与样品中其他组分色谱峰完全分离，色谱峰形对称而尖锐(拖尾因子T=1.00)，按五味子甲素峰计算，理论板数不小于2000。2.2阴性对照试验取处方量以相同工艺制备的阴性对照(缺五味子)，按上述方法测定，结果为

4、：阴性对照色谱图中在与五味子甲素对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，结果表明阴性对照(含灵芝、柴胡和郁金三味药材)用相同制备方法下提取的成分在测定波长处无吸收，故其他成分其他对五味子甲素测定无干扰，见图1。2.3样品溶液制备2.3.1对照品溶液的制备取五味子甲素对照品1005mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度,摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液(40.2μg・mL-1)。　2.3.2供试品溶液的制备取本品约4g，研细，精密称定，置100mL锥形瓶中，加氯仿约

5、40mL，超声处理30min，滤过，残渣加氯仿30mL，超声处理30min，滤过，合并两次滤液，将容器和滤纸多次洗涤液并入滤液中，挥干,残渣加甲醇溶解并转移置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。2.4线性关系考察精密吸取五味子甲素对照品贮备液(0.402mg・mL-1)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL，置5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别取上述对照品溶液各10μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积(A)为纵坐标，进样量(m)为横坐标，进行线性回归，得回归方

6、程A=1194733m+59047，r=0.9996。其线性范围为0.402～6.432μg，结果表明在此范围内呈良好的线性关系。2.5精密度试验取上述对照品溶液10μL，重复进样6次，测定，其RSD=0.75%(n=6)。2.6稳定性试验取上述对照品溶液10μL，分别在0、2、4、6、8、12h进样测定，其RSD=0.98%(n=6),表明样品在12h以内是稳定的。2.7重复性试验取供试品(批号：20050201)6份，每份约4g，按“23”项下方法制备并测定，测出五味子甲素平均含量为15.3mg・g-1，RSD=1.2

7、1%(n=6)。2.8加样回收试验取已知含量供试品(批号：20050201，含量15.3mg・g-1)，加入定量的五味子甲素对照品溶液，依样品测定项下的方法测定，计算其回收率=99.27%，RSD=1.02%(n=6)，结果见表1。表1回收率测定结果(略)2.9样品测定分别吸取对照品和供试品溶液各10μL，按上述方法测定供试品中五味子甲素含量，其结果(n=3)为：批号20050201为15.3mg・g-1、批号20050202为14.2mg・g-1、批号20050203为16.5mg・g-1和批号20050204为13.7

8、mg・g-1。三、讨论3.1本品由灵芝、五味子等4味药材组成，曾经对灵芝所含腺苷等成分进行测定[1]，但其含量较低(低于0.01%)，干扰严重，不宜作为指标成分;结果选用五味子中的五味子甲素作为定量指标，用HPLC法测定其含量，结果阴性无干扰，且方法稳定可靠，专属性强，重复性好。3.2测定时应注意掌握好