降脂评价模型建立的研究进展

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1、降脂评价模型建立的研究进展摘要：高通量降血脂活性成分筛选为高脂血症治疗药物和保健品开发提供了便捷通道。本文简述动物模型的建立，并从胆固醇代谢筛选模型、模拟胆汁胶束法和脂质代谢调控酶的抑制剂方面，对近年来国内外降血脂成分体外筛选方法进行了介绍，为降血脂活性成分的筛选研究提供参考。关键词：高血脂；降血脂；动物模型；体外模型高脂血症主要是指血清总胆固醇（TC）或甘油三酯（TG）水平过高和（或）血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平过低。高脂血症所引起的动脉粥样硬化是造成冠心病、高血压和脑血管疾病的主要原因，全球每年约有1200万人死于心血管病和脑中风。所以，血脂异常的预防与

2、治疗工作显得尤为重要。当前，主要采用药物治疗与非药物治疗相结合的方式。膳食补充、干预是高脂血症治疗中的基础治疗。以传统中草药或提取物、普通食品浓缩物及新兴的多肽蛋白类为主，研发多种新型功能性食品，通过膳食补充的方式进行高脂血症。本文就合理高效的评价模型的建立即有效成分的筛选进行综述。1降血脂动物模型[1-3]采用高脂饲料喂养法，观察小鼠进食高脂饲料60d内血脂变化情况，从而评价高血脂小鼠模型在60d内的稳定性。将大鼠与小鼠在同一时间，相同的实验条件下，进行降血脂功能检测实验，观察两种保健食品对高血脂小鼠和高血脂大鼠血脂各项指标的影响。通过动物实验，对喂食高脂食料的小鼠进

3、行不同膳食纤维降血脂功能比较，通过测定TC、AI等指标进行研究发现，可溶性膳食纤维在降血脂方面有着显著效果。2降血脂体外评价模型目前为止，降血脂的评价方法主要采用降血脂动物模型，动物模型虽然更能够模拟人类高血脂的情况，但是周期长、花费大，不适合化合物的广泛筛选。因此建立一种高血脂细胞体外评价技术，快速筛选、研究和开发具有降低高脂血症的功能因子非常重要。2.1胆固醇代谢筛选模型2.1.1降低细胞中胆固醇含量细胞内胆固醇的流出对维持细胞胆固醇平衡、促进胆固醇逆转运及抗动脉粥样硬化都起着非常重要的用。以血管平滑肌细胞源性荷脂细胞为模型，不同浓度及时间姜黄素处理细胞，高效液相色

4、谱分析法检测细胞内总胆固醇[4]。结果表明，姜黄素可降低胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量，且这种作用跟固醇调节元件结合蛋白Ⅰ的表达上调有一定关系。以3T3-L1脂肪细胞为模型[5]，给予不同浓度的烟酸干预后，收集细胞，采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果表明，烟酸可加速细胞内胆固醇流出，降低细胞内胆固醇含量。张露等[6]研究了银杏叶提取物GBE50对培养细胞内胆固醇代谢的影响，采用胆固醇氧化酶终点法检测GBE50对培养细胞HepG2、HUVEC、SH-SY5Y总胆固醇含量的影响。结果表明，GBE50可有效降低部分培养细胞内总胆固醇的含量。2.1.2阻止胆固

5、醇的吸收Caco-2细胞模型已经成为一种预测药物人体小肠吸收以及研究药物转运机制的标准体外筛选工具。体外人结肠腺癌(Caco-2)细胞系法，可应用于多类药物研究，帮助了解药物的吸收机制，预测体内吸收和药物相互作用，研究药物的小肠代谢情况，从而促进新药研发。向处于对数生长期的Caco-2细胞添加含有药物和14C同位素标记的胆固醇胶束溶液，共培养后裂解细胞，放射定量检测细胞中胆固醇的含量；计算加药物处理与未处理细胞中胆固醇含量的比值。Nagaoka等[7]报道了β-乳球蛋白肽对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响，胰蛋白酶水解后的β-乳球蛋白多肽Ile-Ile-Ala-Glu-

6、Lys可以明显降低Caco-2细胞对胆固醇的吸收。vanHeek等[8]发现Ezetimibe可以选择性的抑制小肠上皮细胞对于胆固醇的吸收。2.2模拟胆汁胶束法2.2.1胆汁酸结合肠道中的胆汁酸经过内部循环，阻断肝胆循环，结合胆汁可使肝脏中的胆固醇减少。胆汁酸结合能力测定：适量样品溶于牛磺胆酸盐缓冲溶液，振荡摇匀后37℃孵育[9]，然后室温下透析，检测透析液中牛磺胆酸盐的含量，计算样品胆汁结合能力。考来烯胺(消胆胺)和考来替泊(降胆宁)为碱性阴离子交换树脂，在肠道与胆汁酸形成络合物随粪排出，故能阻断胆汁酸的重吸收，影响胆固醇吸收。因此具有胆汁酸结合能力的物质，具有一定的

7、降血脂活性。2.2.2胆固醇吸收抑制胆固醇只有溶于混合胶束，才会被运至小肠绒毛进行吸收，因此其溶于胶束是胆固醇吸收的关键。植物甾醇、活性多肽、活性多糖类物质能降低胆固醇在油相和胶束相中的溶解度，与胆固醇竞争进入胆盐胶束，竞争混合胶束的空间并取代胆固醇，干扰其吸收。体外模拟人体的肠道，用超声波乳化的方法制备出一种人造胆汁胶束溶液。此方法可以对这类降血脂活性物质进行筛选。Nagaoka等[10]从β-乳球蛋白水解产物中分离纯化得到了第一条降血脂多肽(IIAEK)。Zhong等[11]先后采用此方法进行了大豆降胆固醇活性肽的分离纯化，并分离到了