鼻咽癌放疗后化疗敏感性的变化

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1、鼻咽癌放疗后化疗敏感性的变化【关键词】鼻咽肿瘤；肿瘤细胞,培养的；基因,mdr1；P-糖蛋白；放射治疗；化疗敏感性　　〔摘要〕目的检测鼻咽癌E1细胞X射线照射前后多药耐药基因（mdr1基因）及其编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是否表达，以及化疗药物敏感性的变化。方法利用RT-PCR、）检测E1细胞X射线照射前后的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素（daunorubicin,DNR）的外排功能。结果鼻咽癌E1细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达；射线照射后较长时间内mdr1基因、P-gp

2、均长时间表达。E1细胞射线照射后对DNR的蓄积作用略有降低。结论鼻咽癌E1细胞X射线照射后化疗敏感性降低。　　〔关键词〕鼻咽肿瘤；肿瘤细胞，培养的；基因，mdr1；P-糖蛋白；放射治疗；化疗敏感性　　Thechangeofchemotherapysensitivityofnasopharyngealcarcinomacellafterradiotherapy　　〔Abstract〕ObjectiveToexaminetheexpressionofmultidrugresistancegene(mdr1)andP-glyco

3、protein(P-gp)innasopharyngealcarcinoma(NPC)E1cellbeforeandafterradiotherapy,asotherapysensitivity.MethodsTheexpressionofmdr1geneanditsproteinP-gperasechainreaction(RT-PCR)and)edtoexaminethefunctionofcelleffluxtodaunorubicin.ResultsExpressionofmdr1-mRNAandP-gpofE1c

4、ellinlongtimeafterradiotherapyulationofE1celldecreasedafterradiotherapy.ConclusionIrradiationdecreasesthechemotherapysensitivityofE1cell.　　〔Keya;tumorcells,cultured;Genesmdr1;P-glycoprotein;radiotherapy;chemotherapysensitivity　　中晚期鼻咽癌的治疗原则为放疗、化疗综合治疗。按照化疗安排在放疗前、放疗同

5、时和放疗后分为：诱导化疗、同步化疗和辅助化疗，目前上述各种匹配方法临床上都有应用。以前往往着眼于化疗后的MDR，但在射线照射后mdr1及P-gp的表达和功能尤其在鼻咽癌细胞及其基础研究较少。多药耐药基因（mdr1基因）扩增及其编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的过度表达是目前已发现的最重要的一种多药耐药（multidrugresistance，MDR）机制，大多数肿瘤MDR的发生被认为与mdr1有关。我们所说的MDR一般是指由化疗引起的，但放疗是否会引起MDR呢？本研究观察体外培养的鼻咽癌E1细胞X

6、线照射前后mdr1基因和P-gp的表达和功能的变化。　　1材料与方法　　1.1细胞和材料鼻咽癌细胞系E1(中山大学肿瘤研究所)，小牛血清（杭州四季青公司），RPMI1640基础培养基（Invitrogen公司），二甲基亚砜（DMSO）（广州化学试剂厂），PBS（博士德生物有限公司），柔红霉素（意大利PharmaciaUpjohnS.p.A），P-gp单克隆抗体C219（Calbiochem-Novabiochem公司），辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（二抗）（晶美公司），DNAMarker（华美生物工程公司），低融点琼脂

7、糖（Promega公司，华美生物工程公司分装），TaqPlusⅡDNA聚合酶(Sangon公司)、PCR扩增缓冲液和dNTP（华美生物工程公司），各种限制性内切酶、连接酶等（Promega、Gibco、Clontech等公司），Trizol试剂盒（Invitrogen公司），mdr1基因及内参照基因三磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH）PCR引物由上海生工公司合成，P-gp阳性对照来自第四军医大学消化研究所胃癌多药耐药细胞系HT70细胞裂解液。　　1

8、.2细胞培养用含10%小牛血清及1%双抗的RPMI1640培养基常规37.0℃、5%CO2培养箱中培养，0.25%胰酶消化、传代。射线照射后继续培养两周后，每隔4天消化一次细胞冻存用于RT-PCR检测和结果FCM检测到：射线照射后E1的阳性细胞数不变，但细胞内的DNR平均荧光度略有降低。说明：E1细胞射