液态食品中脱氢乙酸含量的高效液相色谱测定方法的研究

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1、液态食品中脱氢乙酸含量的高效液相色谱测定方法的研究【关键词】液态食品脱氢乙酸含量高效液相色谱测定方法脱氢乙酸(DHA，Dehydroacetic)，别名二乙酰基乙酰乙酸，固态呈白色或淡黄色结晶粉末，无嗅、无味、熔点108～110℃，沸点270℃，是一种低毒高效防腐、防霉剂。在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用，尤其对霉菌的抑制作用最强。我国自20世纪70年代中期开始用于食品防腐剂至今，曾用于果汁、酱菜、腐乳、人造奶油、乳酸菌饮料、果酱等食品的防腐剂[1]。虽然它的抗菌作用是有效的，但是它的毒性较大的缺点却限制了脱氢乙酸的广泛应用。脱氢乙酸能迅速被人体所吸收，进人人体后即分散于血浆和许多器官中

2、，有抑制体内多种氧化酶的作用。目前，脱氢乙酸的安全性受到质疑，国际上已明确禁止使用，我国在一定范围内允许其使用，但最大允许使用量为0.3g/kg[2]。目前检测脱氢乙酸的国标方法为气相色谱法[3]，前期样品处理过程涉及到有机溶剂萃取、浓缩等步骤，操作起来比较麻烦，而且脱氢乙酸还容易造成色谱峰出现拖尾现象，使得难以获得准确的定性和定量的结果[4]。应用高效液相色谱测定食品中脱氢乙酸的方法已见报道，比如采用超声萃取、氢氧化钠溶液浸泡等方法萃取月饼中的脱氢乙酸后再注射到色谱柱进行分离测定[5]。这些研究为应用高效液相色谱法测定果汁、罐头、瓶装腐乳等液态食品中的脱氢乙酸做了探索性的工作。本研究在

3、国标GB/T5009.121?2003的基础上，通过对目前市场上广泛销售的多种液态食品中的脱氢乙酸以高效液相色谱的方法进行分析，取得了比较满意的结果，克服了气相色谱法前处理复杂以及污染性大的缺点。　　1材料与方法　　1.1实验样品、主要仪器与试剂　　参加测定的样品主要包括目前市场上销售的果汁、腐乳、罐头以及酸奶。HP1100型高效液相色谱仪、紫外分光光度计(上海光谱仪器公司);快速混匀器。甲醇(HPLC级，DIKMA公司);甲醇(分析纯，国药);碳酸氢钠(优级纯，国药);脱氢乙酸(国家标物中心);脱氢乙酸标准溶液：精密称取脱氢乙酸标准品100mg，用甲醇定溶至100mL。再用甲醇稀释成1

4、、5、10、15、20、30mg/L的标准系列溶液，经0.45μm滤膜过滤。测定用水为二次蒸馏水。　　1.2样品处理　　果汁和酸奶混匀后直接称取，腐乳和罐头样品需要先将固体物粉碎后再混匀。预先混匀的样品称取大约5.0g，加入到25.0ml容量瓶中，再加入10ml2%的碳酸氢钠溶液，用双蒸水稀释至刻度，摇匀。静置10min后将上清液过0.45μm滤膜，以10μl进样器加入到液相色谱仪测定。　　1.3色谱条件　　色谱柱C18(5um,250×4.60mm);柱温25℃;流动相选用甲醇?0.02mol/L乙酸铵(5:95);流速1.0mL/min;进样量10ul;检测波长310nm;按照这种条

5、件进行分析，以保留时间定性，以峰面积定量，测定样品中脱氢乙酸的浓度。　　1.4结果计算　　待测样品中脱氢乙酸的含量(g/kg)=C×V×10-3/m　　式中，C:样品中脱氢乙酸的浓度(mg/L);V:样品体积(mL);m:样品质量(g)　　2结果与讨论　　2.1检测波长的确定　　用紫外分光光度计对脱氢乙酸进行全波长扫描检测到两个吸收峰，在310nm处有最大吸收，在230nm处有次强吸收。在310nm处的干扰比在230nm处要小，背景吸收少，因此选择310nm作为检测波长。标准品及待检样品中的脱氢乙酸的检出峰色谱图见图1，脱氢乙酸的保留时间在8.5min左右。　　2.2流动相的选择　　液相

6、色谱柱C18分析中常用的流动相有甲醇?磷酸盐缓冲溶液系统、甲醇?硫酸溶液系统以及甲醇?乙酸盐溶液系统。参考以前的研究结果，从流动相的本底吸收、灵敏度的影响和色谱柱的寿命等方面来考虑，本研究选择了甲醇-0.02mol/L乙酸铵(5:95)。在流动相中加入甲醇，可以提高出峰的对称性，随着甲醇量的增加，出峰时间明显加快，为了避开样品中其它成分的干扰，将甲醇的比例调整到5%时，脱氢乙酸的出峰时间较为理想，且不受杂质的干扰。　　2.3测量精密度和回收率　　取同一罐头样品10份，每5份添加同一个浓度的脱氢乙酸标样，分别进行HPLC分析。从表1的结果可以看出这种方法有较好的重复性和较高的回收率，可以用

7、来进行定量分析。　　2.4线性实验和灵敏度分析　　取同一果汁样品10份，每份约5.0g，置于25mL容量瓶中，分别加入脱氢乙酸标准液(5mg/L)1ml、2ml、3ml、4ml和5ml，样品按照标准步骤处理后取10uL进入色谱柱测定，以出峰面积对脱氢乙酸浓度进行回归分析，结果表明脱氢乙酸浓度与色谱峰面积有良好的线性关系，线性相关系数为0.9993。以信噪比(S/N)为3测得各成分的最低检出限为0.25mg/kg。　　2.5样品的测定