慢性重型乙型肝炎外周血单核细胞上mcd14的表达

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1、慢性重型乙型肝炎外周血单核细胞上mCD14的表达【摘要】目的观察慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞上膜型CD14(mCD14)表达情况，并探讨其意义。方法采用流式细胞术法检测30例慢性重型乙肝患者、20例慢性乙肝患者和10例正常人外周血单核细胞上mCD14水平，应用动态浊度法检测血浆内毒素水平。结果慢性重型乙肝组患者血浆内毒素水平（0.523±0.453）均高于慢性乙肝组（0.0431±0.0327）和健康对照组（0.0215±0.0158），P均<0.05，但慢性重型乙肝组患者外周血单核细胞mCD14表达水平与慢性乙肝组、对照组相比较差异无显著性（P均>0.0

2、5）。结论慢性重型乙肝血浆内毒素水平普遍升高，但外周血单核细胞上mCD14水平并未上调，推测可能与mCD14大量脱落进入血清转变成可溶性CD14(sCD14)有关。【关键词】肝炎，乙型，慢性；单核细胞；CD14慢性重型乙型肝炎患者由于肝细胞功能严重受损，来自肠道的革兰阴性杆菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)易进入体循环，而产生肠源性内毒素（Intestinalendotoxemia，IETM）。IETM对肝脏的影响，并不在于内毒素的直接作用，而是内毒素诱导单核巨噬细胞产生过多的炎症介质导致肝细胞炎症坏死［1］。CD14作为革兰阴性细菌脂多糖的高亲

3、和性受体在此起到至关重要的作用，因此，为了探讨肝炎重型化过程中IETM激活单核巨噬细胞系统诱导失控性炎症反应的机理，我们应用流式细胞技术对30例慢性重型乙肝患者和20例慢性乙肝患者外周血单核细胞上mCD14水平进行研究。　　1资料与方法　　1.1病例选择　　全部病例均为我院感染科2005年6月～2006年10月门诊及住院患者。其中慢性重型乙型肝炎组（早期）30例，男20例，女10例，年龄32.61±7.25岁;慢性乙型肝炎组（轻度）20例，男14例，女6例，年龄31.7±8.32岁。诊断符合2000年《病毒性肝炎防治方案》所定的标准［2］。所有病例均未合并感染或其它慢性疾病

4、。10例门诊体检者为正常对照组，男6例，女4例，年龄29.8±6.58岁。　　1.2标本采集　　无菌条件下一次采集研究对象静脉血4ml，分别置于2支试管中：一支无热原处理的肝素抗凝管（2ml）、离心取上清液放入-30℃冰箱内保存；另一支2%EDTA抗凝管(8ml)，常规采用Ficoll-Hypaque密度梯度法分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)。调整细胞浓度1×106/ml。　　1.3流式细胞术分析　　采用荧光素单抗体标记结合流式细胞仪检测，取流式细胞专用试管2支，分别加入IgG（阴性对照），CD14单克隆抗体

5、各5μl和外周血单个核细胞100μl，混匀置室温20℃避光孵育30min，然后用PBS2ml洗涤，1200r/min离心3min，洗去未结合单抗，加入PBS0.5ml上机检测。采用BD公司的CellQuest软件进行测定分析，每次获取10000个细胞以“门技术”确定单核细胞群并统计结果。　　1.4内毒素测定　　采用天津大学无线电厂生产的BET-32B型细菌内毒素测定仪检测，原理是动态浊度法。自动计算吸光度达到设定值的临界反应时间，根据临界反应时间的对数LgT与内毒素含量的对数LgC负相关规律，用系列梯度稀释的内毒素标准品溶液检测反应时间，制成标准曲线，使用标准曲线法进行定量

6、检测未知样品。（细菌内毒素工作标准品批号：2005-6，中国药品生物制品检定所。鲎试剂批号：20050728，湛江海洋生物制品厂）　　1.5统计学处理　　计量数据以±s表示，各组间差异显著性分析方法采用SPSS统计软件中单因素方差分析。　　2结果　　2.1慢性重型乙肝组与慢性乙肝组、对照组内毒素水平的比较　　慢性重型乙肝组患者内毒素水平与慢性乙肝组、健康对照组相比较差异有显著性（P<0.05），提示慢性重型乙肝患者血浆内毒素水平普遍升高，见表1。表1慢性重型乙肝组与慢性乙肝组、对照组内毒素水平比较(略)　　2.2慢性重型乙肝组与慢性乙肝组、对照组外周血单核细胞mCD1

7、4表达水平比较　　慢性重型乙肝组患者外周血单核细胞mCD14表达水平与慢性乙肝组、健康对照组相比较差异无显著性（P均>0.05），慢性乙肝组与健康对照组患者外周血单核细胞mCD14表达水平差异亦无显著性（P>0.05），见表2。表2慢性重型乙肝组与慢性乙肝组、对照组外周血单核细胞mCD14表达水平比较(略)　　3讨论近年来，IETM与肝炎的关系日益受到重视。一般认为IETM与肝损害互为因果关系，并对肝炎重型化的发生与发展起到关键性作用。动物实验证实各种实验性肝病多伴有IETM。临床观察也表明，尽管对各种