慢性活动性乙型肝炎外周血t细胞亚群上活化抗原的表达论文

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1、慢性活动性乙型肝炎外周血T细胞亚群上活化抗原的表达论文.freelphocytesubsetsinpatientsarkerforactivationofperipheralbloodTlymphocytesinpatientsmunofluorescentthree-colorfloetryphocytesin30patientsalcontrols.TheviralloadinedbyfluorescencequantitativePCR.ResultsExpressionofCD3+Tcellseanthatofthecontrols（P0.01）.Theexpress

2、ionofHLA-DRonCD3+TcellsmunodeficiencyexistsinpatientsandthatTlymphocytesallyactivatedinthepatients.TheactivationofperipheralbloodTlymphocytesinpatientsmainlyinvolvesCD8+subsetanditmayplayanimportantroleintheimmuneresponsetoantiviralinfection.Keyphocytes;CD69;HLA-DR乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝DNA病毒，主要侵犯

3、肝脏并在肝细胞内复制，但对肝细胞无明显杀伤作用，当机体针对HBV产生免疫反应时，才会引起肝脏病变。细胞免疫在乙型肝炎发生、发展过程中发挥着重要作用，机体细胞免疫状态的不同会导致不同的临床结果出现［1］。此外，Rehermann［2］研究发现HBV病毒感染可使机体免疫细胞异常激活和功能紊乱。T细胞是细胞免疫功能的主要执行者，包括CD4+T细胞和CD8+T细胞，目前国内外有关T细胞亚群活化抗原的研究在乙型肝炎发病中的报道较少。为了探讨T细胞及其亚群的激活在CAHB发病机制中的作用，现采用免疫荧光三色标记流式细胞术检测30例CAHB患者外周血早期活化抗原CD69和晚期活化抗原HLA

4、-DR在T细胞上表达的变化，并分析其意义。1材料和方法1.1材料1.1.1研究对象依据2000年中华医学会传染病与寄生虫病学会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎的诊断标准［3］确诊的30例患者，其中男23例，女7例，平均年龄34.8岁（20～58岁），所有患者的HBV血清标志物（HBsAg、HbeAg、抗HBc）均呈阳性，血清HBVDNA定量1×108拷贝/L，丙氨酸转移酶（ALT）异常正常3倍以上，检测前1月未使用过糖皮质激素类药物或其他影响免疫功能的药物治疗;正常人31例，其中男21例，女10例;平均年龄33.6岁（19～56岁），均排除有慢性传染性疾病或感染性疾病，HBs

5、Ag阴性及丙氨酸转移酶正常。1.1.2试剂及仪器三色荧光标记单克隆抗体CD8FITC/CD69PE/CD3PerCP，CD4FITC/CD69PE/CD3PerCP和阴性同型对照γ1FITC/γ1PE/CD3PerCP以及CD3PerCP，红细胞裂解液为BDFACSTMLysingsolution以上产品均购自美国BectonDickinson公司，HLA-DR-FITC、CD4-PCY5、CD8-PCY5单抗和同型对照IgG2b为法国Immunotech公司产品。FACSCalibur流式细胞仪为美国BD公司生产。HBV核酸扩增荧光定量PCR试剂盒为深圳匹基生物工程股份有限

6、公司产品，PCR仪为Roche公司的lightcycler荧光定量核酸检测仪。1.2方法1.2.1标本收集取患者及正常人静脉血5ml，分两管，一管用肝素抗凝，用于流式细胞检测，另一管不加抗凝剂，分离血清后用于肝功能和HBV-DNA病毒载量测定。1.2.2流式细胞术检测外周血T淋巴细胞及其活化抗原肝素抗凝血分装6管，每管加100μl全血，再分别加入10μl上述三种三色荧光标记单抗试剂以及CD4-PCY5、CD8-PCY5、CD3PerCP和HLA-DRFITC单抗及同型对照IgG2b，4℃避光孵育20min，加红细胞溶解液2ml混匀，室温放置5min，离心弃上清，用PBS洗涤2

7、次，将细胞重悬于1%多聚甲醛固定液500μl中，用FACSCalibur流式细胞仪CellQuest软件获取收集30000个细胞/管，用前向散射角（FCS）及侧向散射角（SSC）确定淋巴细胞群再以PerCP标记CD3+的细胞射门并分析数据，以荧光抗体染色阳性细胞占CD3+T细胞的百分率记录结果。1.2.3病毒DNA载量检测采用荧光实时定量PCR法，严格按操作说明书要求进行检测，将结果换算成对数值备用。1.3统计学分析所有资料采用SPSS11.0统计软件进行分析，各组间比较取均数及标准差（x±s）进行t检