蛋白酶体抑制剂ps

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1、蛋白酶体抑制剂PS.freelib.freelol/L的PS-341作用4小时，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达。结果表明：PS-341作用后MM病人MSC细胞因子的表达有显著下降，IL-6、IL-1β、SCF的表达与对照组比较，其显著性检验结果分别为P0.05、P0.01、P0.05，其中IL-1β尤为明显；难治复发组与缓解组比较，IL-1β的表达有显著差异，完全缓解（CR）组IL-1β表达受抑制更明显，IL-6、SCF两组间表达无明显差异；PS-341治疗的1例患者MSC在PS-341作用后I

2、L-1β未见表达；IL-1β的表达与否对IL-6、SCF的表达无影响。结论：蛋白酶体抑制剂PS-341下调MM患者MSCIL-6、IL-1β、SCF细胞因子的表达。【关键词】多发性骨髓瘤EffectsofProteasomeInhibitorPS-341ontheMultipleCytokineExpressionsofMesenchymalStemCellsfromBoneMarroaAbstractToexploretheeffectsofproteasomeinhibitorPS-341onthecytokineexpressionsof

3、mesenchymalstemcells(MSC)inpatientsultiplemyeloma（MM），MSCsof11patientsediumofRPMI1640containing10%FBS.M）细胞的生存、增殖有重要作用［1］。针对骨髓微环境的靶向治疗已成为MM治疗研究的热点之一，并取得了良好的效果。间充质干细胞（MSC）是构成骨髓微环境的重要成员，分泌的细胞因子在MM细胞的归巢、生存、增殖和耐药中起重要作用［2，3］。PS-341（bortezomib，velcade）是二类靶向治疗药物，通过作用骨髓瘤细胞和微环境抑制瘤细胞生长

4、，诱导凋亡，对难治复发和耐药病人也有效［4］。本研究旨在探讨PS-341在治疗MM时对MSC有何影响以及了解MSC是否参与了PS-341对MM骨髓微环境的靶向治疗机制。材料和方法标本来源及主要试剂骨髓间充质干细胞来自住院或门诊MM患者骨髓，实验组共11例，其中CR3例，难治6例（包括1例PS-341治疗后患者），复发2例，生理盐水替代药物干预的患者标本设为对照组，共10例。PS-341购自MillenuimPharniaceuticals，Inc，USA，淋巴细胞分离液（比重为1.077）为上海生化二厂生产，RPMI1640培养液为Gibco公

5、司产品，胎牛血清购自HyClone公司，RNA抽提液Tripure为Roche生产，IL-6、IL-1β、SCF及β-actin引物为上海生物工程技术有限公司合成。MSC的采集、分离与培养无菌抽取骨髓15-20ml，肝素抗凝，1×PBS1∶1稀释后缓慢加入淋巴细胞分离液中，800×g离心30分钟，取中间单个核细胞层置于另一离心管中，PBS洗涤2次，RPMI1640培养液吹打细胞成悬液，种植于含10%FBS的RPMI1640培养液中，置于5%CO2、37℃培养箱培养，待细胞贴壁后更换培养液，以后3-4天换液1次，待细胞数达5×105-1×106时

6、进入下一步实验。实验分组实验设对照组及实验组。对照组不加药物干预，只加等量生理盐水；实验组11例加PS-341，用0.9%生理盐水溶解蛋白酶体抑制剂PS-341，以终浓度50nmol/L作用于MSC4小时，0.25%胰蛋白酶消化离心并制成细胞悬液1ml，方法参见文献〖5］。细胞总RNA提取细胞悬液置于EP管离心，弃上清，Tripure充分裂解细胞，按该试剂提供的提取步骤抽提RNA，紫外分光光度计测浓度并行RNA电泳。RT-PCR按Premega公司提供操作步骤进行。总RNA1μg，oligo(dT)1μl，70℃预热5分钟后冰水浴5分钟，加AM

7、V酶10U，25mmol/LMg2+2μl，10×buffer5μl，加DEPC水至总体积25μl，42℃水浴1小时，95℃水浴5分钟，冰水浴5分钟，-20℃保存。cDNA25μl，10μmol/L上下游引物各2.0μl，10mmol/ldNTP1μl，DNA聚合酶5U，25mmol/LMg2+2μl，10×buffer5μl，各细胞因子的反应条件及引物序列见表1和表2。取PCR产物5μl1.5%琼脂糖凝胶电泳35分钟，紫外光下观察结果、拍照并行灰度分析。PCR的条件及引物的序列分别见表1和表2。Tabel1.PCRconditionsfor

8、detectionofβ-actinIL-6，IL-1βandSCFinMSCfrompatientsofMM（略）Tabel2.Primersequ