基于igy的双抗体夹心elisa法在日本血吸虫循环抗原检测中的初步应用

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1、分类号学校代码10487学号615130200674644密级基于IgY的双抗体夹心ELISA法在日本血吸虫循环抗原检测中的初步应用学位申请人：王淇泓学科专业：病原生物学指导教师：刘文琪副教授答辩日期：2008年5月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofmedicineDetectionofCirculatingAntigensofSchistosomajaponicumbySandwichELISABasedonIgYCandidate:W

2、angQi-hongMajor:BiologicalpathogensSupervisor:AssociateProf.LiuWen-qiHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan，Hubei430074,P.R.ChinaMay，2008独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研宂工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中己经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果。对本文的研宄做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的

3、一切法律后果。学位论文作者签名：口期：年月曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向W家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密口。（请在以上方框内打“a/”）指导教师签名：H期：年月H学位论文作者签名：日期：年月H中文摘要英文摘要目IJS7第一部分抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备及其抗体特异性的动态观察.

4、材料与方法9>15讨论17第二部分基于IgY的双抗体夹心ELISA法在血吸虫病循环抗原检测的初步应用19材料与方法19结果21讨论21参考文献23综述28致i射37基于IgY的双抗体夹心ELISA法在日本血吸虫循环抗原检测中的初步应用中文摘要血吸虫病是一种严重危害人类健康的传染性疾病，是发展中国家的主要寄生虫病之一。我国长江中下游及两湖地区仍有不少人群受到血吸虫病的危害，因此，血防工作所面临的形势仍然十分严峻。血吸虫病的诊断是血吸虫病防治的屮心环节，涉及治疗及预后。我国长期以来是将病原学检查即从粪便中查出虫卵或孵化出毛蚴作为血吸虫病诊断的金标准，并用以确定流行率，

5、但随着控制血吸虫病策略的实施，经反复化疗，流行区病人的感染率和感染度明显下降，单纯依靠粪检不能满足血吸虫病诊断的需要，因此免疫学诊断方法已成为血吸虫病诊断的重要手段。我国学者从50年代开始致力于免疫诊断方法的研究，当前免疫学诊断主要是循环抗体和循环抗原的检测。检测循环抗体的敏感性和特异性虽较好，但难以区分现症感染和既往感染，也无法考核疗效，不利于血吸虫病的监测。循环抗原的检测可评估虫荷数和活动性感染，具有较好的疗效考核价值，同吋还可作为现症感染的依据。但S前循环抗原的检测存在着敏感性低、特异性不理想等问题。因此，如何提高循环抗原检测的敏感性、特异性成为近年来研宄的

6、热点。鸡卵黄免疫球蛋白（Eggyolkimmunoglobulin,IgY）是鸡血液中的IgG被选择性转移到卵黄中形成的，而且是卵黄中的惟一免疫球蛋白类。IgY的结构与IgG相似，但在免疫诊断方面比哺乳动物源性的IgG更具优势：（1）由于种系之间发生距离大，母鸡可对哺乳动物产生更强的免疫应答。（2）母鸡可以持续地产生高亲和力的抗体。较少的抗原量就可以从免疫母鸡的卵黄中得到长效的高滴度IgY抗体。（3）无创性地收集抗体。（4）可快速简单地分离IgY。（5）IgY不能结合类风湿因子，可避免IgG因结合类风湿因子而造成的假阳性。（6）IgY不激活哺乳动物的补体。哺乳动物

7、的IgG可激活补体，导致假阳性的产生。IgY不和补体发生反应，在检测哺乳动物的血清时，可减少由补体造成的干扰。由于IgY抗体能提高免疫检测的敏感性、特异性，还具有产量大、性质稳定等优点，近年来，IgY在疾病的诊断方面得到了广泛的应用。本研宄拟制备抗口本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solubleeggantigen，SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)，并用基于IgY的双抗体夾心ELISA来检测血吸虫病人血清中的循环抗原。本研宄首先制备和鉴定了抗闩本血吸虫SEA的IgY。日本血吸虫SEA经皮下免疫25周龄的莱杭母鸡4次，免疫剂量为lOOjLigSEA/只，免疫间隔10天，

8、于末次免疫