屠宰场埃希氏大肠菌耐药性的调查研究

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1、屠宰场埃希氏大肠菌耐药性的调查研究作者：蓝坚贞吴聪明黄睿蕾摘要：本文以美国NZCLS推荐的纸片扩散法调查了某猪屠宰场埃希氏大肠菌对9种常用抗菌药物的耐药性情况。结果从待宰猪、屠体、场内环境及屠宰加工人员分离的大肠杆菌对养猪生产中用作促生长剂的四环素及复方新诺明的耐药率最高，对常用于预防及治疗的氨苄西林、链霉素的耐药率也较突出，而对养猪生产中几乎未使用的头孢氨苄、多粘菌素B的耐药率最低；屠宰加工人员分离菌对9种抗菌药物的耐药率普遍低于另外三类分离菌；待宰猪分离菌对9种抗菌药物耐药率与屠体分离菌有较好的符合率，说明动物源耐药

2、菌可经屠宰污染转移至新鲜肉食品上。关键词：屠宰场；屠体；埃希氏大肠菌；耐药性耐药菌的产生和扩散是一个全球性的人W题，许多国家己开始关注M:对公众健康的潜在危害。由于缺乏冇关食品动物使川抗菌药物给公众健康带來危害的确切和记够的资料，对兽医上使川抗尚药物尤其是养殖业中大量使用抗牛.素促牛.长剂这个14题长期以来争议不休11］。为了对细菌耐药性从动物转移到人的危险性作出评价，须从兽医、农业及医疗部门收集存关抗菌药物使用及耐药菌产牛.发展的标准化、连续性数据，尤其是需要监测分离自食品动物、动物源食品及人体的细菌药物敏感性12’3

3、’4］。抗生素的广泛使用，不仅引起病原菌产生耐药性，也会引起条件性致病菌及体内外共生菌产生耐药性。而且共生菌可能还是病原菌耐药基W的贮库，因此共生菌耐药水T是监控抗屮素选择压力及顶测病原菌耐药性趋势的良好指示器［5］。食品动物的耐药性井生菌可通过与动物接触及污染食品沿食物链进入人体，因此监测分离自环境、有病及健康动物、动物源食品、杏病及健康体的指示菌（如人肠杆菌及肠球菌）对常用抗菌药物的敏感性情况，就可了解细菌耐药性的流行趋势，为耐药细菌或耐药基因从动物和转移到人的危险性评价提供参考数据。山于猪是我国最秉要的食品牛产动物

4、，因此本文进行了猪屠宰场埃希氏大肠菌耐药性调查，以期获得屠宰场内污染性人肠杆菌的耐药程度及耐药谱等情况，给决策部门、兽医及人医部门提供细菌耐药性的动态资料，为今P开展细菌耐药性研究萸定®础。1材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基伊红美兰琼脂，批号20011123；普通肉汤，批号20020524；营养琼脂，批号20011215；MH琼脂，批号20020812。均购自杭州天和微牛物试剂有限公司。1.1.2肠杆菌科细菌生化编码微量鉴定管型号GYZ-lle，批号20020806，购自杭州天和微生物试剂有限公司。1.1.3标准

5、菌株大肠埃希氏尚ATCC25922；金黄色葡韻球尚ATCC25923；铜绿色假单胞阐ATCC27853。均购自杭州天和微生物试剂有限公司。1.1.4药敏纸片药物纸片种类及含药量见K表，批号略，购£

6、杭州天和微生物试剂宥限公司。购买的每批药物纸片在使用前均按NCCLS1999法规要求用上述3种标准齒株进行质控，符合要求者方可使用，每周用标准荫株ATCC25922进行质控，符合要求者继续使用。表1各种抗菌药物纸片含药量及判断标准抗荫药物名称纸片含药M（Mg/片）抑菌圈判断标准（醐）耐药（R）中介（M）敏感（S）氨苄丙林10<

7、1314-16^17尖孢氨苄30^1415-17^18环丙沙星5<1516-20^21链霉素10^1112-14^15四环素30^1415-18>19氯霉素30<1213-17^18呋喃唑酮300^1415-16^17复方新诺明23.75/1.25^1011-15^16多粘菌素B300u彡89-11^121.2.试验方法1.2.1标本采集从待宰猪、居体、焐宰场（主耍是居宰车间）环境及居宰加丄人员体内分别采样。人体及活猪采集直肠拭了标木，居体以火菌棉签擦拭多处位置采集标木，场A环境以火菌小匙采集表面下层污水及士壤标木。1.

8、2.2菌株的分离直肠拭子及样本棉签直接4:伊红美兰琼脂平板上涂抹，37°C,24小时培养后，从平板上随机挑取3-5个紫黑色带金属光泽的荫落进行纯培养及生化鉴定。土壤及污水标木先以灭菌生理盐水进行10倍梯度稀释，再从2-3个梯度稀释液屮吸取0.lmL倾布于伊红美兰琼脂平板上，37°C,24小时培养后，挑取大肠杆菌可疑菌落进行下一步操作。1.2.3菌株的鉴定按杭州天和微生物试剂有限公司介绍的肠杆荫科细荫生化编码微M鉴定管鉴定法进行。即将分离纯化的可疑人肠杆菌菌株接种到系列细菌生化编码微朵鉴定管內，37°C,24小时培养后，对

9、菌株的生化反应结果进行判断并进行编码，按此编码检索肠杆菌科细菌生化编码表即讨获得结果，对不确定的荫株进•-步补充生化反应T以判定。1.2.4药敏试验整个药敏试验严格按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS1999）推荐的纸片扩散法操作程序进行。在营养琼脂平板上挑取单个菌落接种于2ml普通肉汤管内，37°C培养16-