大鼠重症肌无力中枢损害时c┐fos基因表达

《大鼠重症肌无力中枢损害时c┐fos基因表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠重症肌无力中枢损害时c┐fos基因表达　　Keyyastheniagravis;receptors，cholinergic;anti-bodies;genes，Fos;centralnervoussystem;rats　　Abstract:AIMToexplorethemechanismofcentralner-voussystem（S）dysfunctioninmyastheniagravis（MG）.METHODSc-fosexpressionmunohistochemicalmethodfolloini

2、strationofIgGpurifiedfromMGpa-tientsera.RESULTSStrongexpressionofFospus，hypothalamusetalafterintracerebroventricularadministrationofIgG（AChab）.CONCLUSIONItisconcludedthatc-fosmayberelatedtothemechanismofSdysfunctioninMG.　　0引言　　重症肌无力（MG）主要的致病机制是患者体内存在的乙酰胆碱受体抗体

3、（AChRab）与神经肌肉接头（NMJ）处的乙酰胆碱受体（AChR）结合，而引起NMJ处乙酰胆碱（ACh）传递障碍［1］，出现肌无力等临床症状.然而，有研究表明MG病变部位并不局限于NMJ处.有研究表明，部分MG患者伴有中枢神经系统（S）的异常，如锥体束征、癫痫、精神症状、记忆认知障碍［1-7］及脑电图及脑干诱发电位异常［8-10］.Brenner等将从MG患者血清中提取的IgG注入大鼠侧脑室，发现其不仅影响下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能，而且还出现MG模型样症状［11］.此外，Lefvert等的研究表明，MG患者

4、脑脊液中存在AChRab［12］.上述研究提示MG患者AChab可引起S功能异常，但机制不甚明了.为进一步探讨MG的S受损机制，用MG患者AChab进行免疫组化研究发现，AChab可与S神经-AChR免疫交叉结合［13］.本项研究，以能够反映神经元功能变化的原癌基因c-fos的表达作为神经元兴奋的指标，观察其在大鼠MG中枢损害时的变化，以求进一步在形态学上探寻MGS受损的证据.　　1材料和方法　　1.1实验动物用成年雄性SD大鼠24只，体质量200～250g，（由本校实验动物中心提供），安静数天，给予充足、清洁的

5、饮水，严密观察摄食和健康状况.实验组大鼠14只，对照组10只.　　1.2提取IgG选择具有典型MG临床症状，抗胆碱酯酶药物实验和血清AChRab阳性的全身型MG患者为抽血对象.取患者血清10mL，用硫酸铵盐析法及亲和层析法提取IgG.另取健康人血清10mL，提取IgG，方法同上，作为对照.　　1.3大鼠脑室内注射IgG选成年SD大鼠14只，用10gL-1戊巴比妥钠经腹腔麻醉（30～40mgkg-1体质量），固定于立体定向仪上，切开颅顶皮肤，暴露颅骨.自Bregma点向后1.3mm，向左旁开1.3mm处为脑室穿刺点

6、.钻颅，自脑表面进针4.0mm，缓慢注入25uLMG患者IgG，隔日1次，共3次.对照组脑室内注入正常人IgG，方法同上.观察脑室内注入IgG前后SD大鼠行为变化，如摄食、体质量、四肢运动、呼吸频率及动度等.　　1.4组织准备第三次注射IgG后5h，用10gL-1戊巴比妥钠经腹腔麻醉SD大鼠，经主动脉灌注40gL-1多聚甲醛固定;取脑组织，置于200gL-1蔗糖溶液中过夜;冰冻切片，片厚40nm.　　图1－图6略　　1.5免疫组织化学先用PBS洗切片，10min×3次，入含3gL-1TritonX-100的PBS

7、中，室温下30min，然后入Fos抗体（美国Santa-Cruz公司，11000稀释），4℃下孵育36～72h;以PBS洗切片，10min×3次，入生物素化的羊抗兔二抗（美国Dako公司，1500稀释），室温下孵育4h，PBS洗，10min×3次;再入ABC复合物（美国Dako公司，1500），室温下孵育2～4h，PBS洗切片，10min×3次，再用硫酸镍铵强化法呈色.最后脱水、透明、封片（Fig1～6）.　　1.6图象分析以Quantimet570图象分析系统（Leica公司）进行分析，分别计4张下丘脑、海马及

8、皮层平面的Fos免疫反应细胞.　　2结果　　实验组SD大鼠脑室内第3次注入MG患者IgG后脑内有多个脑区可以见到大量的Fos阳性神经元.第3次注射后3h，大脑皮层、基底节、丘脑、海马、脑干各颅神经运动核团、听神经核、小脑皮层，下丘脑外侧区、穹隆、隔区、扣带回、海马、丘脑、乳头体、黑质、红核、纹状体等即有Fos表达，4～5h时Fos表达达到高峰，12h后除大脑皮层、下丘脑、