基于高滴度自然抗角蛋白自身抗体对小鼠机体影响的初步分析

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1、基于高滴度自然抗角蛋白自身抗体对小鼠机体影响的初步分析：郑力强，田蓉，李巍，付萌，邢影，王雷，顾伟杰，高天文，刘玉峰【目的：探索高滴度自然抗角蛋白自身抗体(AKautoAb)对小鼠多器官系统的影响.方法：AKautoAb转基因小鼠及同窝对照小鼠于常规条件下饲养，观察小鼠体质量、生存时间等一般情况，Kaplan?Meier法绘制生存曲线.取20周龄以上小鼠检测血常规和血生化值.结果：和同窝对照小鼠相比，转基因小鼠体质量减轻(P<0.001)，生存时间缩短（P<0.05），脾肿大，肝脏、脾脏、肾脏和

2、体质量的比值增大(P<0.05）；血常规显示白细胞数降低，淋巴细胞数下降（P<0.001）；血小板升高，血清总蛋白升高，尿素氮升高(P<0.05）.结论：AKautoAb的过度表达可能对小鼠的机体造成一定的损害，对多器官系统也产生重要的影响.本探究对于全面分析自然自身抗体的功能具有重要的意义.【自然自身抗体；角蛋白；疾病；小鼠，转基因　0引言　　　　自然自身抗体（Naturalauto?antibodies,NAA）广泛存在于正凡人和多种动物体内，具有抗感染、免疫调节、肿瘤监视、维持内环境

3、稳定等多方面的功能［1-2］，对机体具有重要的保护功能.然而随着对NAA功能探究的进一步深进，大量证据发现，NAA具有潜伏的病理意义［1-4］.那么NAA对机体到底有利还是有害呢？目前尚无明确结论，这也是目前免疫学及相关学科关注的热门新题目.我们在前期工作中建立了自然抗角蛋白自身抗体(anti?keratinautoantibody,AKautoAb)转基因小鼠，发现其具有增高的血清AKautoAb滴度，为进一步探究AKautoAb的功能提供了良好的模型.我们长期观察了饲养于常规条件下的转基因小鼠及同窝对照

4、小鼠，对20周龄以上小鼠的生理情况进行深进探究和分析，为明确NAA的病理意义进行积极的探索.　　1材料和方法　　1.1材料AKautoAb重链转基因小鼠由本室李巍博士建立［5］，在本校动物中心常规条件下饲养.主要仪器包括全自动生化仪(COBASINTEGRA400)，血球分析仪(MedonicCA620?VET).　　1.2方法对照观察了37对小鼠的生存时间，23对小鼠的体质量、脏器体质量比.分析了18对小鼠的血常规及血生化改变：取尾静脉血25μL，稀释液（含抗凝剂）稀释500倍后全自动血球分析仪检测血常规

5、，总共20项指标；摘除小鼠眼球取血，分离血清，全自动生化分析仪检测总蛋白、白蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐共5项.　　统计学处理：用SPSS13.0统计软件分别对计量资料和计数资料进行配对t检验，Kaplan?Meier法绘制生存曲线，Logrank检验进行生存率比较.P<0.05即以为差异具有统计学意义.　　2结果　　本探究在前期工作中获得了3系具有较高血清AKautoAb滴度的转基因小鼠，每系均具有相似的表型，本文展示的是39系小鼠的表型改变.　　2.1一般情况及体质量在20wk前，转基因小鼠和同窝

6、对照小鼠无明显差别.20wk左右以后，转基因小鼠逐渐出现病态表现：明显消瘦，弓背畸形，摄食减少，体毛皱褶，活动能力差（图1）.转基因小鼠体质量减轻，和同窝对照小鼠相比具有统计学意义(P<0.001).15对雌性小鼠中转基因小鼠体质量(17.24±2.79)g，对照小鼠为(24.64±3.95)g，8对雄性小鼠中转基因小鼠体质量(19.61±1.83)g，对照小鼠为(24.95±4.79)g，雌性小鼠的体质量减轻比比雄性更加明显.　　Tg：转基因小鼠；WT：同窝对照小鼠.　　图1转基因小鼠和同窝对照小鼠

7、的大体图片（略）　　Tg：转基因小鼠；WT：同窝对照小鼠.　　图2转基因小鼠和同窝对照小鼠的脾脏比较（略）　　2.2脏器质量和体质量比转基因小鼠的脾脏明显增大(图2)，脾脏、肝脏、肾脏和体质量比增加且有统计学意义（n=23,t值分别为2.36,2.62,2.40，P均<0.05，图3）.　　2.3生存率和同窝对照小鼠相比，转基因小鼠生存曲线较低，生存时间缩短，Logrank检验显示生存率差异有统计学意义(n=37,P<0.05,图4）.　　图3转基因小鼠和同窝对照小鼠脏器和体质量比（略）　　图4

8、生存曲线（Kaplan?Meier法绘制）（略）　　2.4血常规转基因小鼠血小板（PLT）计数升高(t=2.71)，淋巴细胞（LYMF）尽对值降低(t=6.86)，白细胞（outhonL,etal.Self?reactiveantibodies(naturalautoantibodies)inhealthyindividuals［J］.JImmunolMethods,1998,216:117-137.　　［2］Q