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时间:2018-10-30
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1、扁平苔藓皮损中MIFMMP [摘要]目的:巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在扁平苔藓发病中的作用探讨。方法:采用免疫组化方法和RT-PCR法检测30例扁平苔藓组织和30例正常皮肤组织中MIF与MMP-9的表达情况。结果:MIF与MMP-9在扁平苔藓组织中的表达明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.05);MIF和MMP-9在扁平苔藓皮损中的表达呈正相关(r=0.636,P<0.01)。结论:MIF在扁平苔藓基底膜带损坏过程中可能有促进作用,其机制可能与上调MMP-9的表
2、达有关论文下载。 [关键词]扁平苔藓;基底膜带;MIF;MMP-9 [中图分类号]R781.5[文献标识码]A[]1673-7210(2010)11(c)-013-02 TheexpressionandsignificanceofMIFandMMP-9inlichenplanus edicalUniversity,Taiyuan030001,China) [Abstract]Objective:ToinvestigatetheeffectonthepathogenesisofMIFandMMP-9inliche
3、nplanus.Methods:Immunchistochemicaltechniqueandreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)alskin.Results:TheexpressionsofMIFandMMP-9arkedlyincreasedinlichenplanusthanthoseinthenormalskin(P<0.05);thereaycontributetothedamageofbasementmembranezosterinlich
4、enplanus,entmembranezoster;MIF;MMP-9 扁平苔藓(lichenplanus)是一种病因不明的慢性或亚急性炎症性皮肤病,其组织学特征显示为上皮基底细胞的液化变性、基底膜带损伤。目前关于其基底膜带损伤机制的研究甚少。本文旨在检测扁平苔藓中MIF、MMP-9的表达,进一步探讨两者与扁平苔藓基底膜带损坏的关系。 1材料与方法 1.1材料 病例组30例均系2008~2009年在我院皮肤科就诊,经临床和病理确诊的扁平苔藓患者。其中,男17例,女13例;年龄20~64岁,平均41.9岁。所有患
5、者在半年内均未使用过激素和免疫抑制剂治疗。于患者典型皮损处取材。对照组30例为同期在我院整形科、普外科所取的正常皮肤组织,其中,男20例,女10例;年龄18~60岁,平均37.6岁。两组患者年龄、性别差异无统计学意义,具有可比性。各标本取材后分两份,一份经中性福尔马林液固定,石蜡包埋后用于免疫组化染色;另一份予以液氮迅速冷冻后置于-80℃冰箱保存,用作RT-PCR实验。 1.2试剂 兔抗人MIF多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品,兔抗人MMP-9多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。二步法PV-6000免疫组
6、织化学检测试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。MIF、MMP-9引物由上海生工生物工程技术有限公司合成。 1.3方法 1.3.1免疫组化法采用PV-6000二步法:备用标本进行4μm厚连续切片后脱蜡,3%H2O2去离子水阻断内源性过氧化物酶;滴加一抗(MIF浓缩液1∶150稀释,MMP-9浓缩液1∶100稀释),37℃孵育1h;滴加二抗PV-6000,37℃孵育20min;二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染、脱水、封片。 1.3.2RT-PCR法采用Trizol一步法提取各标本总RNA,并用分光光度法检
7、测其浓度及纯度。加入逆转录反应体系合成cDNA,将其置于PCR反应体系,按RT-PCR试剂盒说明扩增GAPDH(作为内参照)、MIF、MMP-9。各基因引物如下,GAPDH上游引物:5′-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3′,下游引物:5′-TCCACCACCCTGTTGCTGGA-3′,扩增片段307bp。MIF上游引物:5′-AGAACCGCTCCTACAGCAAG-3′,下游引物:5′-ATTTCTCCCCACCAGAAGGT-
8、3′,扩增片段234bp。MMP-9上游引物:5′-TTGACAGCGACAAGAAGTGG-3′,下游引物:5′-GCCATTCACGTCGTCCTTAT-3′,扩增片段179bp。PCR扩增条件:94℃预变性2min,94℃变
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