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1、正交设计优选脑血康丸中总氨基酸的测定工艺1.武警总医院药剂科北足100039；2.北京中医药大学北京100102;3.江丙省药品检验检测研究院（江丙省药品与医疗器械质量工程技术研究中心）江丙南昌330029【摘要】目的：优选出脑血康丸中总氨基酸的最佳测定工艺。方法：采用L9（34）正交试验设计，以水解温度、水解时间和盐酸浓度为考察因素，脑血康丸中总氨基酸的含量和得率为考察指标，确定脑血康丸中总氨基酸的最佳提取条件。结果：最佳测定工艺为水解温度100°C,水解时间为22h,盐酸浓度为6mol?L-1
2、。结论：该优化测定工艺可用于脑血康丸中总氨基酸的测定，为脑血康丸的进一步研究提供了参考。【关键词】正交设计；脑血康丸；总氨基酸；含量测定【中图分类号1R927.2【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）6-0142-02脑血康丸水蛭经加工制成的丸，能活血化瘀，破血散结。木品收载于《国家食品药品监督管理局国家药品标准》YBZ11972005-2009Z,只有一个薄层鉴别，难以控制质量。木文建立了脑血康丸的含量测定方法，采用正交设计法对脑血康丸中总氨基酸的测定方法［1〜4］进行改进，
3、提高有效成分的提出率，可用于质量控制。1仪器与试药德国syknm公司S7130Aminoacidreagentorganizer全自动氨基酸分析仪。SartoriusBT25S型十万分之一电子天平，混合氨基酸对照品（sigma公司，H型，批号：02090110｝，脑血康丸（四川康特能药业有限公司,批号为：20130509、20130510、20130511）。水为超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：磺基强酸性阳离子交换树脂LCAK06/Na,（150mm&t
4、imes;4.6mm,5μm），缓冲液A（称取抒檬酸三钠11.8g、t宁檬酸6.0g和苯酚0.5g,加适量水溶解，再加甲醇65ml、37%盐酸5.6ml和辛酸0.1ml用水稀释至1L，加氢氧化钠调节pH至3.45并通过0.45?m滤膜过滤）、缓冲液B（取二水柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g加适量水溶解，再加辛酸0.1ml用水稀释至1L，加37%盐酸调节pH至10.85并通过0.45?m滤膜过滤）、再生液（称取氢氧化钠20.0g、EDTA0.2g,用水稀释至1L并通过0.4
5、5?m滤膜过滤）、样品稀释液（称取柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g和苯酚2.0g,加适量水溶解，再加37%盐酸10.4ml和辛酸0.1ml用水稀释至1L,加氢氧化钠调节pH至2.20并通过0.45?m滤膜过滤）、茚三酮试剂（称取茚三酮20g和苯酚2.0g,用400ml钠钾缓冲液和600ml甲醇溶解）。检测波长为440nm（脯氨酸）和570nm（其他氨基酸）；进样量：50?1。流速：A泵（缓冲液）0.45ml/nim,M泵（茚三酮试剂泵）0.25ml/nim,梯度洗脱结果见表1,程序升温见表2。
6、在上述色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液依法测定，结果见图1〜I冬16。2.2对照品及供试品溶液的制备2.2.1对照品溶液精密量取混合氨基酸对照品lml,置25ml量瓶中，加样品稀释液至刻度，摇匀，即得。2.2.2供试品溶液取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g,精密称定，置厌氧水解管中，加入6mol?L-l盐酸溶液（含0.1%苯酚）10ml，将样品全部浸没，置冰块（冰水）中冷冻10min。充高纯氮气1〜2min,注意保持水解管竖直，不要将液面溅起，移开氮气后立即盖好软塞，
7、旋紧密封盖。将水解管置于(lOO±1)°C恒温烘箱中水解22h。水解完成后，冷却，混匀，精密吸取水解液0.2ml,于60°C以下浓缩至干。加入3ml样品稀释液，震荡混匀，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得。2.3脑血康丸中总氨基酸含量测定方法的建立2.3.1标准曲线的制备精密吸取混合氨基酸对照品溶液80,125,125,60,80μl分别置10,10,5,1,1ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液50μl,注入氨基
8、酸测定仪进行测定。以峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。2.3.2精密度试验精密吸取混合对照品溶液50μl注入氨基酸分析仪中进行测定重复测定6次，测得天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和脯氨酸峰面积的RSD分别为1.5%，2.0%,1.7%,1.6%,1.1%,1.4%,1.5%,0.8%,1.3%,1.2%,1.0%,1.1%,1.5%,1.7%,1.4%和1.2%，
