大麻素ii型受体（cb2）在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布

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1、大麻素II型受体（CB2）在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布　　大麻(marijuana,植物学名cannabissativa),其主要活性成分是△9四氢大麻酚(△9THC),既是毒品又是具有抑制细胞生长、抗炎症、抑制肿瘤生长等作用的治疗药。大麻素(CB)受体是指对大麻类物质如△9THC有应答的受体,分两型CB1和CB2,它们均为G蛋白耦联受体。CB1受体包含473个氨基酸,该受体在进化中有着高度保守性和重要性,主要分布于神经系统。CB2受体包含360个氨基酸,其保守性不强,主要分布于外周免疫系统。近年来大麻素受体在神经系统以外的表达和功能研究,特别

2、是在肿瘤方面的研究逐渐受到重视。大量研究表明,大麻素CB2受体的激活抑制皮肤肿瘤的生长[1]。我们采用抗CB2N末端抗体做免疫组化检测,研究CB2受体在人类正常皮肤及皮肤肿瘤的表达分布,可为今后CB2激动剂的抗皮肤肿瘤研究提供有用的实验资料。　　　　1材料和方法　　1.1材料组织来自我科门诊病例从2000～2007年期间活检标本（经100mL/L的甲醛固定和石蜡包埋,切片机切片3μm,其中人正常皮肤、黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌各20块标本）;一抗（1∶350兔抗人抗CB2抗体）购自AffinityBioReagents,ABR,USA;二抗（通用型

3、山羊抗兔IgG抗体Fab段HRP多聚体）通用型SP系列检测试剂盒兔SPKit购自北京中山金桥生物技术有限公司;DAB显色试剂盒购自北京中山金桥生物技术有限公司。　　1.2方法　　1.2.1免疫组化漂浮切片用ABC法染色[2],切片以二甲苯进行脱蜡后270℃枸椽酸溶液进行抗原修复,以300mL/L双氧水室温孵育20min,以阻断内源性过氧化物酶。PBS冲洗3次,与一抗4℃过夜。次日,PBS冲洗3次,与二抗37℃下孵温30min,PBS冲洗3次后,棕黄色DAB显色试剂盒显色。每次实验均设立阴性对照一个,即在免疫组织化学染色过程中不加CB2受体一抗,其余步骤

4、相同,阴性对照DAB不能使其显色。苏木素染色完成后将切片贴在玻片上,脱水、封片,在OLYMPUS2BHF型显微镜下观察。　　1.2.2图像分析应用ImageProPlus彩色图像分析系统,每张切片选取5个有代表性的400倍视野,CB2受体阳性细胞为视野中着棕褐色的圆形或椭圆形区域,测量每个标本CB2受体阳性细胞面积及累积光密度IOD值的均值并记录。　　1.2.3统计学处理实验数据采用SPSS11.0统计软件处理。免疫组化结果CB2受体阳性细胞面积及累积光密度IOD值均用x±s表示,根据资料性质应用方差分析方法对实验数据进行统计学分析。P<0.05

5、为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1CB2受体在人正常皮肤表达的检测结果在人类正常皮肤中CB2染色主要位于表皮层的角质层和基底细胞层(图1A)。表明本实验所用抗CB2抗体可特异性识别CB2。CB2受体在人皮肤恶性肿瘤中表达的检测结果发现在皮肤恶性肿瘤黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌的肿瘤细胞中均有CB2受体染色阳性细胞,且均有较强表达,在皮下组织中表达不明显(图1B～D)。　　图1CB2受体在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布（×400）（略）　　A:人正常皮肤;B:恶性黑素瘤;C:基底细胞癌;D:鳞状细胞癌.　　2.2CB2受体阳性细胞面积及累积光密度

6、IOD值统计学分析应用ImageProPlus彩色图像分析系统测定阳性细胞面积及累积光密度IOD值（表1）,应用方差分析方法分析（表2）,阳性细胞面积中,皮肤恶性肿瘤较正常皮肤均有统计学意义;其中恶性黑素瘤较正常皮肤、基底细胞癌及鳞癌组均有统计学意义;基底细胞癌和鳞癌比较无统计学意义。IOD趋势与阳性细胞面积一致。表明正常皮肤CB2受体表达强度明显小于皮肤恶性肿瘤,其中恶性黑素瘤表达最强,基底细胞癌和鳞癌间无统计学意义。　　表1CB2受体阳性细胞面积及累积光密度IOD值（略）　　表2CB2受体阳性细胞面积及累积光密度IOD值方差分析（略）　　aP<

7、;0.05vs恶黑组、基底细胞癌组、鳞癌.　　自Pross等[3]发现CB2受体在脾脏、淋巴结和淋巴细胞的表达之后,大麻受体在神经系统以外的表达和功能研究,特别是在肿瘤方面的研究逐渐受到重视。迄今,CB受体及其配体的研究已经有了阶段性进展。大量研究表明,大麻素受体被活化后可抑制皮肤肿瘤的生长。　　已有报道CB2受体在正常皮肤主要分布于上皮细胞、巨噬细胞、肥大细胞、感觉神经纤维、毛囊、汗腺等部位[4],参与皮肤感觉传导、疼痛机制、皮肤免疫、皮肤肿瘤、细胞分化等重要的生理病理过程[5]。通过对神经胶质细胞瘤[6]、甲状腺上皮瘤[7]的研究,表明在体外大麻素选

8、择性作用于肿瘤细胞。且大麻素受体调节细胞存活通路过程中对瘤细胞和非肿瘤细胞存在不