zbtb7基因mrna在佛波酯诱导的白血病细胞分化中表达上调

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1、Zbtb7基因mRNA在佛波酯诱导的白血病细胞分化中表达上调：王黎芳，韩之波，黄颖，杜蓬，孙爱华【摘要】　　目的分析白血病细胞系分化前后Zbtb7基因mRNA表达水平的变化情况。方法50nmol/L佛波酯(PMA)刺激6孔板培养的U937、K562白血病细胞系，在诱导刺激的0、1、3、5d，荧光定量PCR检测细胞内Zbtb7基因mRNA表达量的改变。结果相对于正常培养的细胞，U937、K562细胞在PMA刺激后Zbtb7mRNA表达增高，差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)，且增高量存在时间依赖性。结论白血病细胞分化过程中伴随有Zbtb7基因表达

2、的改变。【关键词】白血病Zbtb7基因mRNA表达　　ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofZbtb7geneinPhorbolesters(PMA)induceddifferentiationofleukemiacelllines.Methods50nmol/LPMAePCRinthecellsafterinductiononday0,1,3and5,respectively.ResultsTheexpressionofZbtb7inleukemiacelllinesarkedlyenhancedaftertreatedb

3、yPMA(P<0.01,P<0.05,respectively)andtheenhancementedependentmanner.ConclusionTheexpressionofZbtb7inleukemiaishigh.Inthedifferentiationofleukemiacelllines,thereisavariationofexpressionofZbtb7gene.　　KEYA)诱导分化的U937和K562细胞为模型，采用realtimePCR相对比较法检测和分析Zbtb7在细胞分化前后mRNA表达量的改变。　　1材料与方法　　1.

4、1材料　　B系急性淋巴细胞白血病细胞Nalm6、人B淋巴瘤细胞Daudi、人巨核细胞白血病细胞Mo7e、急性淋巴人白血病细胞Molt4、前B细胞REH、急性单核细胞白血病细胞U937、红白血病细胞K562、T淋巴细胞HPB、人红白血病细胞系HEL、早幼粒白血病HL60由本实验室常规方法传代和培养。TRIzol、MMLV逆转录试剂盒购买自Invitrogen公司；佛波酯(Phorbolesters,PMA)、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)购买自Sigma公司；IMDM购买自GIBCO公司；FCS购买自天津血液研究所，0.22μm滤膜过滤除菌

5、；SYBRGreen荧光定量PCR反应试剂盒购买自美国SYBRGreen公司。　　1.2cDNA的制备　　各细胞系培养至对数生长期，各取1×106个细胞加入TRIzol提取RNA，MMLV逆转录成cDNA。　　1.3白血病细胞系的诱导分化　　人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞以IMDM、100mL/LFCS、100u/mL青霉素0.1mg/mL链霉素为培养体系进行培养。至生长状态最佳时接种于6孔培养板，每孔5mL培养基接种1×106个细胞，培养体系采用IMDM、150mL/LFCS、100u/mL青霉素0.1mg/mL链霉素。PMA以DMSO溶解成贮存液，浓

6、度为162mmol/L，加入U937细胞培养体系成工作浓度为50nmol/L。培养1、3、5d时，弃上清，PBS清洗已贴壁分化的细胞后，以终质量浓度为2.5g/L的胰酶消化。取1×106个细胞加入TRIzol提取RNA，MMLV逆转录成cDNA。人红白血病K562细胞以IMDM、100mL/LFCS、100u/mL青霉素0.1mg/mL链霉素为培养体系进行培养。至生长状态最佳时接种于6孔培养板，每孔5mL培养基接种1×106个细胞，培养体系采用IMDM、150mL/LFCS、100u/mL青霉素0.1mg/mL链霉素。PMA以DMSO溶解成贮存液，浓度为162m

7、mol/L，加入K562细胞培养体系成工作浓度为50nmol/L。培养1、3、5d时，900g离心10min，取1×106个细胞加入TRIzol提取RNA，MMLV逆转录成cDNA。　　1.4荧光定量PCR　　基于FBI1cDNA(BC084568)序列采用StanfordUniversityPrimerDesignsofte2.stanford.edu/cgibin/SGD/er)进行引物设计，送上海生工合成。上游引物FerFerRev，2μLcDNA。反应条件：50℃2min1个循环，95℃15min1个循环，94℃15s、58.5℃30