p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的相关性

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1、p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的相关性【关键词】,基因,p53；基因,p16；癌,肝细胞　　Correlationofp53genemutationandp16genedeletiona　　【Abstract】AIM:Todetecttheprobabilityofp53genemutationandp16genedeletionintheplasmaofthepatientsa(HCC)andtoexploreitscorrelationentofHCCanditsclinicalsig

2、nificance.METHODS:PCRplifyp53geneexon58andtheimmunohistochemistry(SPp16)ployedtodeterminethedeletionofp16gene.Thedifferencebetetastasisutationanddeletion.RESULTS:Of33casesofHLL17(51.55%),shoutationofp53;themutationrateinmetastasisgroup(n=18)etastasis

3、group(n=15).CONCLUSION:Thereisacorrelationbetutationandp16genedeletion.ThemutationratemayhavethereferencevalueindiagnosisandprognosispredictionofHCC.　　【Keya,hepatocelluar　　【摘要】目的：检测肝癌患者血浆中p53基因突变和细胞核中p16基因缺失的机率，研究与疾病发生、发展的相关性并探讨其意义.方法：实验采用聚合酶联链式反应（PC

4、R）扩增p53基因外显子5~8和免疫组织化学方法SPp16，对其突变和缺失进行分析.结合临床患者有无肝组织以外转移来对比差异性.结果：33例肝癌患者中，有17例结果显示血浆循环核酸p53基因突变；有转移病灶组18例的突变率高于无转移病灶组15例.结论：血浆p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的发生、与疾病的轻重及病灶转移有相关性，突变机率在临床鉴别诊断和治疗预后中有参考价值.　　【关键词】基因，p53；基因，p16；癌，肝细胞　　0引言　　在各类疾病中，肝癌以恶性程度高、治疗效果差、病灶易转移和

5、给患者带来极大身心损害而排在前列〔1〕.检测血浆中p53和细胞核中p16基因突变机率，对治疗效果判定、康复干预都有参考和使用价值〔2〕，对肝癌的发生和发展的危险因素评估、早期预防提供实验方法学.　　1材料和方法　　1.1材料收集病例35例，患者均经腹部B超、CT或MRI影像学诊断，CEA,AFP多项肿瘤标志物蛋白检测.有胸腹水患者21例抽取样本进行组织细胞学，4例肝穿刺活检病理学诊断.21例术后证实为肝癌，12例失去手术机会，2例因病情恶化死亡.本组研究实为33例，肝癌无转移15例，肝癌合并肺、

6、胃、肠、脑等部位转移癌18例.男性27例，女性6例，年龄27~69（中位年龄48.27岁）.自静脉采血分离血浆，不受时间、饮食和治疗影响.31例正常对照为献血员血浆，男性20例，女性11例，年龄25~55岁（中位年龄42.93岁）.　　1.2方法PCR扩增仪使用美国PE公司智能型热循环仪，引物设计参照序列如下〔3〕：p53基因外显子5，扩增第5个显子（P56.1和P5.2）序列上游引物顺序5＇TTCCTCCTGCAGTACC3＇,214bp，上游引物顺序3＇GCCCCAGCTGCTCACCAT3

7、＇；p53基因外显子6，扩增第6个显子（P6.1和P6.2）序列上游引物顺序5＇CACTGATTGCTCTTAGGTCT3＇,144bp，上游引物顺序5＇AGTTGCAAACCAGACCTCAGG3＇；p53基因外显子7，扩增第7个显子（P7.1和P7.2）序列上游引物顺序5＇TCTCCTAGGTTGGCTCTGAC3＇,133bp，上游引物顺序5＇CAAGTGGCTCCTGACCTGGA3＇；p53基因外显子8，扩增第8个显子（P8.1和P8.2）序列上游引物顺序5＇CCTATCCTGAGTA

8、CTGGTAA3＇,166bp，上游引物顺序3＇GTCCTCCTTGCTTACCTCG3＇.　　DNA提取方法为静脉血2.5mL，EDTAK2抗凝，混匀后3500r/min离心10min，分离血浆低温-20℃保存.操作程序按DNA提取试剂盒（由博华公司提供QLAmpDNAminikit，Germany）说明书进行.PCR扩增循环条件为：95℃40s，60℃30s，75℃40s，重复循环32次，70℃10min完成延伸反应.再经非变性聚丙烯酰胺凝胶SSCP电泳，银染，应用凝胶自动成像系统分析.阳性