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时间:2018-10-28
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1、p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的相关性【关键词】,基因,p53;基因,p16;癌,肝细胞 Correlationofp53genemutationandp16genedeletiona 【Abstract】AIM:Todetecttheprobabilityofp53genemutationandp16genedeletionintheplasmaofthepatientsa(HCC)andtoexploreitscorrelationentofHCCanditsclinicalsig
2、nificance.METHODS:PCRplifyp53geneexon58andtheimmunohistochemistry(SPp16)ployedtodeterminethedeletionofp16gene.Thedifferencebetetastasisutationanddeletion.RESULTS:Of33casesofHLL17(51.55%),shoutationofp53;themutationrateinmetastasisgroup(n=18)etastasis
3、group(n=15).CONCLUSION:Thereisacorrelationbetutationandp16genedeletion.ThemutationratemayhavethereferencevalueindiagnosisandprognosispredictionofHCC. 【Keya,hepatocelluar 【摘要】目的:检测肝癌患者血浆中p53基因突变和细胞核中p16基因缺失的机率,研究与疾病发生、发展的相关性并探讨其意义.方法:实验采用聚合酶联链式反应(PC
4、R)扩增p53基因外显子5~8和免疫组织化学方法SPp16,对其突变和缺失进行分析.结合临床患者有无肝组织以外转移来对比差异性.结果:33例肝癌患者中,有17例结果显示血浆循环核酸p53基因突变;有转移病灶组18例的突变率高于无转移病灶组15例.结论:血浆p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的发生、与疾病的轻重及病灶转移有相关性,突变机率在临床鉴别诊断和治疗预后中有参考价值. 【关键词】基因,p53;基因,p16;癌,肝细胞 0引言 在各类疾病中,肝癌以恶性程度高、治疗效果差、病灶易转移和
5、给患者带来极大身心损害而排在前列〔1〕.检测血浆中p53和细胞核中p16基因突变机率,对治疗效果判定、康复干预都有参考和使用价值〔2〕,对肝癌的发生和发展的危险因素评估、早期预防提供实验方法学. 1材料和方法 1.1材料收集病例35例,患者均经腹部B超、CT或MRI影像学诊断,CEA,AFP多项肿瘤标志物蛋白检测.有胸腹水患者21例抽取样本进行组织细胞学,4例肝穿刺活检病理学诊断.21例术后证实为肝癌,12例失去手术机会,2例因病情恶化死亡.本组研究实为33例,肝癌无转移15例,肝癌合并肺、
6、胃、肠、脑等部位转移癌18例.男性27例,女性6例,年龄27~69(中位年龄48.27岁).自静脉采血分离血浆,不受时间、饮食和治疗影响.31例正常对照为献血员血浆,男性20例,女性11例,年龄25~55岁(中位年龄42.93岁). 1.2方法PCR扩增仪使用美国PE公司智能型热循环仪,引物设计参照序列如下〔3〕:p53基因外显子5,扩增第5个显子(P56.1和P5.2)序列上游引物顺序5'TTCCTCCTGCAGTACC3',214bp,上游引物顺序3'GCCCCAGCTGCTCACCAT3
7、';p53基因外显子6,扩增第6个显子(P6.1和P6.2)序列上游引物顺序5'CACTGATTGCTCTTAGGTCT3',144bp,上游引物顺序5'AGTTGCAAACCAGACCTCAGG3';p53基因外显子7,扩增第7个显子(P7.1和P7.2)序列上游引物顺序5'TCTCCTAGGTTGGCTCTGAC3',133bp,上游引物顺序5'CAAGTGGCTCCTGACCTGGA3';p53基因外显子8,扩增第8个显子(P8.1和P8.2)序列上游引物顺序5'CCTATCCTGAGTA
8、CTGGTAA3',166bp,上游引物顺序3'GTCCTCCTTGCTTACCTCG3'. DNA提取方法为静脉血2.5mL,EDTAK2抗凝,混匀后3500r/min离心10min,分离血浆低温-20℃保存.操作程序按DNA提取试剂盒(由博华公司提供QLAmpDNAminikit,Germany)说明书进行.PCR扩增循环条件为:95℃40s,60℃30s,75℃40s,重复循环32次,70℃10min完成延伸反应.再经非变性聚丙烯酰胺凝胶SSCP电泳,银染,应用凝胶自动成像系统分析.阳性
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