jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异

《jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、Jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异：郭占鹏,梅晰凡,李全双,王滢丽,张赫　刘世琼【摘要】目的Jagged1蛋白在大鼠肌源性干细胞(MDSCs)体外增殖分化为神经样细胞过程中的表达差异研究。方法大鼠乳鼠骨骼肌消化后体外培养增殖,第5代传代后细胞分为2组：对照组完全培养基培养，诱导组加入诱导剂诱导。6d后观察2组细胞的形态变化,并进行NSE免疫细胞化学鉴定。然后通过免疫荧光观察Jagged1蛋白的表达差异。结果诱导组细胞NSE染色阳性，免疫荧光结果显示对照组Jagged1蛋白表达阳性，实验组基本不表达。结论大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Jagged1蛋白表

2、达存在明显差异。【关键词】肌源性干细胞;神经样细胞;Jagged1蛋白　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheroleofJagged1proteinduringtheproliferationanddifferentiationofmusclederivedstemcells(MDSCs)intoneuron-likecellsinvitro.MethodsTheskeletalmusclestemcellsderivedfromtheneonateratentalgroup.Morphologicalchangeandimmunocytochemical

3、identificationentintervention.ImmunofluorescenceployedtoexaminetheexpressiondifferenceofJagged1protein.ResultsNSEpositivecellsentalgroup.Immunofluorescenceshoentalgroupuchlousclederivedstemcells;neuron-likecells;Jagged1protein　　肌源性干细胞(musclederivedstemcells,MDSCs)具有良好的自我更新和增殖能力的干细胞，具多向分化潜能。它能够分化为神

4、经样细胞,修复受损伤的神经,并可使受损的神经功能得到恢复[1]。近来一些研究表明Notch信号传导途径可能对肌源性干细胞干细胞增殖分化起非常重要的调控作用[2]。本实验选取Notch通路中的关键节点Jagged1蛋白的表达水平作为研究对象，为进一步研究肌源性干细胞分化为神经样细胞的机制打下基础。　　1材料与方法　　1.1实验动物和试剂　　SD大鼠乳鼠(辽宁医学院实验动物中心提供);Ⅱ型胶原酶(Sigma)，分散酶，胰蛋白酶(Sigma)，标准胎牛血清(四季青)，DMEM培养基(Gibco)，兔抗鼠Desmin、NSE、Jagged1蛋白抗体(武汉博士德)。　　1.2肌源性干细胞原代培养和鉴

5、定　　SD大鼠乳鼠无菌条件下取骨骼肌，采用混合酶(100mL含有Ⅱ型胶原酶0.2g，Ⅱ型分散酶0.48g，CaCl20.028g)消化1h，筛网过滤，离心后含有15%胎牛血清(FBS)的高糖DMEM重悬细胞，37℃、5%CO2培养;记为PP1，分别间隔2、16、24和24h差速贴壁纯化细胞,记为PP2、PP3、PP4、PP5。PP5长满培养瓶底后，0.25%胰蛋白酶消化传代培养。对传代细胞行Desmin免疫细胞荧光鉴定。　　1.3各组细胞培养和诱导前后表面抗体表达　　传代后细胞培养离心重悬后，分为2组进行培养：1组：对照组，用完全培养基进行培养;2组：诱导组，以分化培养基(10%FBS,2

6、0μg/LNGF,1%青链霉素，DMEM)进行培养培养。相差显微镜下观察细胞形态变化，培养6d后行NSE免疫细胞化学鉴定和Jagged1蛋白免疫荧光表达检测。　　1.4免疫细胞化学检测　　取生长有细胞的盖玻片，用4%多聚甲醛固定15min，3%BSA封闭30min，加入一抗，阴性对照用PBS代替一抗，4℃过夜。避光进行以下操作：加入二抗，37℃孵育30min，30μL/mL33258染色8min，甘油封片，荧光显微镜下观察结果。　　1.5免疫细胞荧光检测　　将消毒完的盖玻片放到培养皿中，加入细胞悬液，5%CO2孵箱培养2～3d，4%多聚甲醛固定30min;0.3%Triton-100作用5

7、min，PBS洗2次，3%H2O2作用20～30min;加封闭液20min，甩去多余液体，不洗，一抗4℃过夜;二抗1：100作用2h;SABC30min;DAB试剂盒作用30min;苏木素染色0.5min;梯度酒精脱水(75%-85%-95%-100%)，每次4min。二甲苯Ⅰ10min，二甲苯Ⅱ10min。缓冲甘油封片，无荧光指甲油封4周。　　2.3诱导后细胞形态观察　　经诱导6d后，细胞生长状态良好，出现长突起，类似