hplc法测定注射用胸腺肽α1的含量

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1、HPLC法测定注射用胸腺肽α1的含量【关键词】高效液相色谱法；注射用胸腺肽α1；含量测定［ABSTRACT］Objective:Toimprovethecontentdeterminationmethodforthymopetidumα1injection.Methods：Contentof20μLthymopetiduminjectioninedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)instrumentfixed,4.6mm×250mm).ThemobilephaseAol/LKDP(pH5.7)andAN（92∶8）

2、,mobilephaseBL/min,detectiveandcolumntemperaturetemperature.Results：Thelinearrangeforcontentofthymopetidumα1injectiong/mL,r=0.9999,theaveragerecoveryproveddeterminationmethodissimple,timesavingprovethequalitystandardsofinjectivethymopetidum.［KEYanceliquidchromatography(HPLC)；Thymopetid

3、umα1injection；Contentdetermination注射用胸腺肽α1主要成分为胸腺肽α1，是化学合成的28肽，临床用于慢性乙型肝炎和作为免疫损害病者的疫苗免疫应答增强剂。在2010年版中国药典二部中收录的注射用胸腺肽α1标准［1］和国家食品药品监督管理局颁布的药品试行标准（YBH26822005）中规定的含量测定方法，梯度洗脱时间较长，操作繁琐且重复性较差。本实验对注射用胸腺肽α1含量测定方法进行了改进，现报道如下。1试药与仪器1.1试药胸腺肽α1对照品及注射用胸腺肽α1（海南某药品研发公司提供），对照品含量：99.78%，乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾为分

4、析纯。1.2仪器Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；DAD二极管阵列检测器（美国安捷伦公司）。2实验方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：LunaC18(5μm，4.6mm×250mm)；以0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH5.7)乙腈(92∶8)为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，在8min之内流动相B由3%增加到9%，在2min之内流动相B降为3%，并平衡5min，检测波长为210nm，进样量20μL，理论板数按胸腺肽α1峰计算应大于5000。2.2测定方法余邦良等.HPLC法测定注射用胸腺肽α1的含量取本品适量，用0.

5、05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH6.8)溶解，制成1mL中约含胸腺肽α10.1mg的溶液，作为供试品溶液（临用前配制），精密量取20μL，注入液相色谱仪，参照高效液相色谱法［2］，记录色谱图；另精密称取胸腺肽α1对照品适量，用0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH6.8)溶解，制成1mL中约含胸腺肽α10.1mg的溶液，作为对照品溶液（临用前配制），同法测定，按外标法以峰面积计算，其平均含量应符合规定。2.3辅料干扰试验按处方量精密称取甘露醇、氢氧化钠，并另取注射用胸腺肽α1，按“2.2项”制成辅料溶液和供试品溶液，分别取20μL注入液相色谱仪，按含量测定法记录

6、色谱图（图1、2），从图谱上可以看出,这些辅料在主峰吸收处均无吸收，故不影响注射用胸腺肽α1含量的测定。图1空白辅料色谱图图2注射用胸腺α1色谱图2.4回收率试验称取按处方量计算的辅料9份，分别加入标示量80%、100%、120%的胸腺肽α1，每种标示量各3份样，分别置相应的量瓶中，按“2.2项”制成供试品溶液，按含量测定方法，记录色谱图，计算其回收率。平均回收率为99.4%，RSD为0.25%。2.5精密度试验取同一批号的注射用胸腺肽α16瓶，按“2.2项”制成供试品溶液，按含量测定方法，每个供试品溶液平行测定6次，记录色谱图，主峰面积的RSD为0.34%。取注射用

7、胸腺肽α1适量，按“2.2项”制成1mL中约含胸腺肽α11mg的溶液，并分别稀释成含胸腺肽α10.8、0.4、0.2、0.1、0.05mg/L的溶液，按含量测定方法测定，记录色谱图，以进样浓度X（mg/L）为横坐标，胸腺肽α1峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线。计算其线性方程为：Y=18980X+13480433，r=0.9999。线性范围0.05～0.8mg/L。2.8样品含量测定取注射用胸腺肽α18瓶（1.6mg/瓶），各瓶精密加入0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH6.8)1.6mL溶解，合并，精密吸取5mL置50mL量瓶中，稀释至刻度，