hplc法测定注射用胸腺肽α1的含量

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1、HPLC法测定注射用胸腺肽α1的含量【摘要】目的：改进注射用胸腺肽α1含量测定的方法。方法：色谱柱为LunaC18(5μm，4.6mm×250mm)；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH5.7)乙腈(92∶8)，流动相B为乙腈，梯度洗脱，流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；柱温为室温；进样量20μL。结果：胸腺肽α1在0.05～0.8mg/mL范围内具有良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.4%。结论：改进后的方法操作简单，省时，重复性好，进一步完善了产品的质量标准。【关键词】高效液相色谱法；注射用胸腺肽α1；含量测定［ABSTRACT］Objecti

2、ve:Toimprovethecontentdeterminationmethodforthymopetidumα1injection.Methods：Contentof20μLthymopetiduminjectionwasdeterminedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)instrumentfixedwithaLunaC18(5μm,4.6mm×250mm).ThemobilephaseAwaswaterwith0.05mol/LKDP(pH5.7)andAN（92∶8）,mobilephaseBwasAN,andgradientel

3、utionwasused.Theflowratewas1.0mL/min,detectivewavelengthwas210nmandcolumntemperaturewasroomtemperature.Results：Thelinearrangeforcontentofthymopetidumα1injectionwas0.05～0.8mg/mL,r=0.9999,theaveragerecoverywas99.4%.Conclusion：Theimproved7determinationmethodissimple,timesavingwithgoodrepeatability,and

4、canhelptoimprovethequalitystandardsofinjectivethymopetidum.［KEYWORDS］Highperformanceliquidchromatography(HPLC)；Thymopetidumα1injection；Contentdetermination注射用胸腺肽α1主要成分为胸腺肽α1，是化学合成的28肽，临床用于慢性乙型肝炎和作为免疫损害病者的疫苗免疫应答增强剂。在2010年版中国药典二部中收录的注射用胸腺肽α1标准［1］和国家食品药品监督管理局颁布的药品试行标准（YBH26822005）中规定的含量测定方法，梯度洗脱时间较长，操作

5、繁琐且重复性较差。本实验对注射用胸腺肽α1含量测定方法进行了改进，现报道如下。1试药与仪器1.1试药胸腺肽α1对照品及注射用胸腺肽α1（海南某药品研发公司提供），对照品含量：99.78%，乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。1.2仪器7Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；DAD二极管阵列检测器（美国安捷伦公司）。2实验方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：LunaC18(5μm，4.6mm×250mm)；以0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH5.7)乙腈(92∶8)为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，在8min之内流动相B由3%增加到9%，在2min之内

6、流动相B降为3%，并平衡5min，检测波长为210nm，进样量20μL，理论板数按胸腺肽α1峰计算应大于5000。2.2测定方法余邦良等.HPLC法测定注射用胸腺肽α1的含量取本品适量，用0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH6.8)溶解，制成1mL中约含胸腺肽α710.1mg的溶液，作为供试品溶液（临用前配制），精密量取20μL，注入液相色谱仪，参照高效液相色谱法［2］，记录色谱图；另精密称取胸腺肽α1对照品适量，用0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH6.8)溶解，制成1mL中约含胸腺肽α10.1mg的溶液，作为对照品溶液（临用前配制），同法测定，按外标法以峰面积计算，其平均含量应符合

7、规定。2.3辅料干扰试验按处方量精密称取甘露醇、氢氧化钠，并另取注射用胸腺肽α1，按“2.2项”制成辅料溶液和供试品溶液，分别取20μL注入液相色谱仪，按含量测定法记录色谱图（图1、2），从图谱上可以看出,这些辅料在主峰吸收处均无吸收，故不影响注射用胸腺肽α1含量的测定。图1空白辅料色谱图图2注射用胸腺α1色谱图2.4回收率试验7称取按处方量计算的辅料9份，分别加入标示量80%、100%、120%