facs aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定

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1、FACSAria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定【摘要】　　目的：探讨FACSAria流式细胞仪分选细胞亚群的调试参数和最佳设定条件.方法:采用进口分选质控试剂AccudropBeads和自配鞘液为材料.在FACSAria流式细胞仪上，对分选液滴的振荡频率(Freq)、振动幅度（Ampl）和液滴间隔值（Gap）进行调试，摸索分选的最佳设定值.结果：使用100mm喷嘴，主液流窗Ampl设定为30±2，Gap灰带宽度为(2.0±0.5)mm，侧液流断点窗4个分叉斑点直径调为(2±0.2)mm，4叉液流束光斑调至集中明亮，

2、边界清晰，液滴偏转延时值为25±1附近，调试效率最高.其分选纯度可达99%,分选回收率可达98%.结论:流式分选条件的设定和建立，对于提高分选细胞活性，获得高纯度和高回收率的细胞，提供了快速调试的途径.【关键词】流式细胞术；分选;细胞；条件　　【Abstract】AIM:Tofindtheoptimaladjustmentconditionsandparametersforsortingcellsubsetseter.METHODS:UsingimportedsortingqualitycontrolAccudropBead

3、sandselfmadesheathfluidasmaterials,plitude(Ampl)andthegapsbetpleuntilanoptimalconfigurationforthesortingnozzle,themainstreamplm,andeachspotofthefourforksinthesidestreambreakoffpointm,thelightspotofthe4forkstreamsentefficiencyreacheditsoptimum,entandfixingofthecond

4、itionsforsortingetryisofsubstantialsignificancetothepurity,activityandprecisionofthesortedcellsasetry;sorting;cell;conditions　　0引言　　在流式细胞分选前的参数设定和调试是细胞分选的关键性工作，它的好坏与快慢，直接影响细胞分选的效率、纯度和精度.目前国内外对于分选技术方法学研究和探讨的文献报道并不多见［1-2］.FACSAria流式细胞仪是集临床和科研为一体的高精密分析和高速细胞分选的仪器，其主要用

5、途是从细胞群中高速分选出被指定的细胞、细胞器或质点，以便做进一步细胞鉴定、功能研究或细胞克隆培养，其分选速度之快是其它方法无法比拟的［3-4］.由于分选之前仪器的条件设置和调试比较繁琐、费时,如果不能很好地掌握这些参数和条件的设置技巧，将会对分选细胞的效率、纯度、精度以及活性的保持产生较大影响.为最大限度地发挥仪器的功能和效率，我们对细胞分选调试的参数和最佳条件的设定做了一些探索和研究.　　1材料和方法　　1.1材料　　FACSAria分选型流式细胞仪,稀释鞘流液FACSFloanCoulter公司产品；分选所用标本为第四

6、军医大学西京医院查体健康人肝素抗凝全血.　　1.2方法　　1.2.1样品制备将AccudropBeads用FACSFloL,充分混匀，每份取100mL全血样品加入CD4FITC和CD8PE避光染色30min,上QPrep型免疫学样品制备仪,溶解红细胞，稳定和固定白细胞，3h内上机分析和分选.　　1.2.2主液流调校观察主液流窗的主液滴和卫星点及液流断点位置状况：将主液流断点窗的Stream打开，并设为中速（应用70mm喷嘴）,相对固定液滴振荡频率（Freq）,调液滴振动振幅（Ampl），使第1液滴的值落在240附近，液

7、滴间隔值（Gap）尽量恒定,使液流断点位于窗口的中上部.　　1.2.3侧液流调校打开侧液流窗的高压，激活分选测试（Testsort）窗.此时运用主液流窗中的Ampl调试，使四束偏转液流和废液流5个光斑间距尽可能地拉开，各光斑调至明亮、集中.此后安装两路或四路分选收集管装置.打开分选窗，点开分选门，观察偏转的分选液流是否落入分选相应的收集管正中.如果没有，可轻轻左右拉动侧液流窗的电压滚动条，使分选液流准确落入收集管中.之后关闭分选电压.将主液流窗中实际调出的Drop1值添到Drop1默认窗口中.液流调整好后的Gap值应在默认值

8、±3的范围内.　　1.2.4确定液滴偏转延迟加电时间建立一个新的实验文件夹，再建立两个子文件夹(Specimen和Tube).在右侧电脑的通用工作页面上建立获取模板，用横轴FSCA和纵轴SSCA建立一个散点图，并设单个微球的矩形门P1.点击Tube使其变为绿色的采集箭头,打开分选窗口，