他克莫司处理的未成熟树突状细胞对小鼠炎症性肠病的作用及其机制研究

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1、他克莫司处理的未成熟树突状细胞对小鼠炎症性肠病的作用及其机制研究［摘要］目的探讨他克莫司(Tac)处理的未成熟树突状细胞(imDC)对小鼠克罗恩病模型中炎性肠病的作用及其具体的机制。方法体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),加入Tac处理抑制其成熟，以2,4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制作克罗恩病模型。将48只小鼠随机分为4组，分别为对照组、模型组、imDC组、Tac-imDC组，每组各12只。对照组给予50%乙醇溶液灌肠，其余三组分别给予TNBS灌肠造模，各组在灌肠前24h和灌肠后24h分别经尾静脉输注相应的PBS或者imDC,对照组和模型

2、组经尾静脉输注PBS，imDC组输注1X106个未经Tac处理过的imDC，Tac-imDC组输注1X106个经过Tac处理过的imDC。每天记录小鼠一般情况，7d后分别行疾病活动指数(DAI)、结肠大体形态损伤指数(CMDI)和结肠病理组织学(TDI)评分，取小鼠结肠组织行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-10(IL-10)、转化生子因子(TGF-3)和白介素-17(IL-17)的水平变化。结果相比于对照组，模型组的DAI、CMDI和TDI评分明显升高［DAI:(0.75±0.10)比(5.12±1.05)分;CMDI：(0.70±0.12)比

3、(6.52±1.18)分；TDI：(0.34±0.03)比(5.53±1.12)分；均P他克莫司处理的未成熟树突状细胞对小鼠炎症性肠病的作用及其机制研究［摘要］目的探讨他克莫司(Tac)处理的未成熟树突状细胞(imDC)对小鼠克罗恩病模型中炎性肠病的作用及其具体的机制。方法体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),加入Tac处理抑制其成熟，以2,4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制作克罗恩病模型。将48只小鼠随机分为4组，分别为对照组、模型组、imDC组、Tac-imDC组，每组各12只。对照组给予50%乙醇溶液灌肠，其余三组分别给予TNBS灌肠造模

4、，各组在灌肠前24h和灌肠后24h分别经尾静脉输注相应的PBS或者imDC,对照组和模型组经尾静脉输注PBS，imDC组输注1X106个未经Tac处理过的imDC，Tac-imDC组输注1X106个经过Tac处理过的imDC。每天记录小鼠一般情况，7d后分别行疾病活动指数(DAI)、结肠大体形态损伤指数(CMDI)和结肠病理组织学(TDI)评分，取小鼠结肠组织行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-10(IL-10)、转化生子因子(TGF-3)和白介素-17(IL-17)的水平变化。结果相比于对照组，模型组的DAI、CMDI和TDI评分明显升高［DA

5、I:(0.75±0.10)比(5.12±1.05)分;CMDI：(0.70±0.12)比(6.52±1.18)分；TDI：(0.34±0.03)比(5.53±1.12)分；均P［Keywords]Tacrolimus；Dendriticcells；Inflammatoryboweldisease；Crohn’smicemodels树突状细胞(dendriticcell,DC)作为体内最重要的抗原提呈细胞，不仅直接参与机体对外来抗原的免疫反应，而且在诱导免疫耐受中也起着十分重要的作用，其诱导免疫耐受的机制可能是在未成熟的DC(immaturatedendr

6、iticcell,imDC)表面低表达主要组织相容性抗原-II(MHC-II)和共同刺激因子CD80、CD86,缺失这些表面因子后其抗原提呈能力减弱，无法提供幼稚T细胞向效应T细胞转化的第二信号［1］。传统观点认为小鼠克罗恩病模型主要是以辅助性T细胞1(Thelper1cell,Thl)过度活化为主的免疫失调引起的疾病［2］，但是近来发现辅助性T细胞17(Thelper17cel,Thl7)/调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg)轴的失衡在疾病发生和发展方面也起着重要的作用［3］。Tac作为新一代的新型免疫抑制剂，能全面抑制T淋巴细胞

7、的的作用，较环孢素强100倍，在溃疡性结肠炎的治疗中已经初见其效［4］。本实验通过体外培养小鼠骨髓来源的imDC,在培养过程中经过Tac处理，检测其成熟程度，研究其在缓解小鼠炎症性肠病模型中的作用及其机制。1材料与方法1.1实验动物与试剂1.1.1动物6〜8周龄SPF级雌性bal/c小鼠48只，体重18〜22g，购于武汉大学动物实验中心［许可证号：SCXK(鄂)2014-0004］,饲养于武汉市三医院动物实验中心。1.1.2试剂胎牛血清购于浙江天杭生物科技股份公司；重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)和重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)购

8、于Peprotech公司；2，4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)购于Sigma公司