丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122478HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究研究生：王洁导师：徐凯智教授专业：麻醉学二级学院：唐山工人医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河

2、北医科大学所有。木m丨丨本士口士口士0/+^主/-T河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：年4月如日目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………4英文缩写……………………………………………………………………7研究论文丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究前言………

3、……………………………………………………………8材料与方法………………………………………………………………8结果……………………………………………………………………13附图……………………………………………………………………16附表……………………………………………………………………18讨论……………………………………………………………………19结论……………………………………………………………………23参考文献………………………………………………………………23综述丙泊酚对神经免疫影响的研究进展………………………………27致谢…………………………………………

4、…………………………40个人简历……………………………………………………………………41中文摘要丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究摘要目的：本次实验旨在观察丙泊酚对正常脾源性树突状细胞和脂多糖激活后树突状细胞的分化及表面分子MHCII和CD80的影响，同时从脂多糖（LPS）-Toll样受体4（TLR4）通路和神经内分泌免疫网络（β1肾上腺素能受体通路）两个角度初步探索其可能存在的相关受体机制，进一步明确丙泊酚的免疫调节特性和抗炎作用，从而为丙泊酚在危重病人中的合理应用提供一定的实验基础和理论参考。方法：本次实验的研究靶点是小鼠脾源性的树突状细

5、胞，本次实验主要应用的检测技术是流式细胞术。具体方法如下：1本次实验使用的动物是6到8周的雄性BALB/c小鼠，体重20±1克。采用颈椎离断法将小鼠处死，当即无菌下取出小鼠脾脏，采用小鼠淋巴细胞分离液法制备小鼠脾源性单个核细胞悬液，之后采用磁珠分选的方法获得小鼠脾源性树突状细胞。2实验分为四组，即正常对照组；丙泊酚刺激组（5，10和20ug/ml）；脂多糖（1ug/ml）刺激组和1ug/ml脂多糖+丙泊酚（5，10和20ug/ml）刺激组。树突状细胞被均匀种植在48孔培养板中，实验分在两个培养板同时进行，其中一个培养板主要包含正常对照组，单纯丙泊酚（5，10和

6、20ug/ml）处理组以及脂多糖刺激组；另外一培养板主要进行的是正常对照组，脂多糖组以及脂多糖刺激1小时之后加入不同浓度丙泊酚(5，10和20ug/ml)刺激组。按照以上分组的情况分别向细胞中加入对应的刺激剂进行干预。将培养板放入无菌CO2培养箱中进行细胞培养。3经过8小时之后，将细胞培养板中的细胞进行分离和提取。之后主要通过流式细胞技术进行检测和分析，观察比较不同组别之间小鼠脾源性树突状细胞的分化情况、共激分子CD80和表面分子MHCII类分子的表达水平以及相关受体（TLR4和β1肾上腺素能受体）的表达情况。结果：正如所参照的文献中描述的一样，小鼠脾源性树突

7、状细胞在抗1中文摘要highCD11c-APC和CD45RB-PE标染后通过流式检测分成了CD11cCD45RlowlowhighlowlowB树突状细胞，CD11cCD45RB树突状细胞和CD11cCD45RBhighlow树突状细胞三个亚群。其中CD11cCD45RB树突状细胞就是我们所lowhigh熟知的传统树突状细胞，而CD11cCD45RB树突状细胞则被称为调节性树突状细胞，在免疫应答中主要发挥负向免疫调控的作用。单纯丙泊酚刺激组的结果显示：与正常对照组相比，临床相关浓度的丙泊酚（5ug/ml和10ug/ml）对树突状细胞分化的影响不具有统计学意义。

8、当丙泊酚的剂量较大时（本次实验使用浓度