沙门菌检测技术的进展

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1、沙门菌检测技术的进展冼桂江【摘要】近年来，随着分子生物学技术，免疫学技术及其他新的检测技术的应用，沙门菌的检测方法，打破了传统分离培养的单一方法。木文对目前各种沙门菌的检测技术进行了系统的概述。【关键词】沙门菌；检测技术；进展沙门菌在自然界中分布广泛，是一种重要的人畜共患病原菌。不但能引起家畜、家禽及其他动物发牛.感染，而且能通过污染食物导致人的食物中毒。在世界各国的各类细菌性食物中毒中，以沙门菌引起的在英国为首位，在美国为第二位。在欧洲，每年有超过16万人感染沙门菌【1】；在美国毎年有140万人感染沙门菌【2】；在我国，由沙门菌引起的食源

2、性食物中毒占首位或第二位【3】。生物学特性沙门菌属肠杆菌科，革兰染色阴性杆菌，适宜温度为37°C.大多数沙门菌有菌体鞭毛能运动，菌体溶解时能产生内毒素【4】。有些沙门菌含有耐药因子，对某些抗生素产生耐药作用。沙门菌菌型繁多，已确认的沙门菌有2500个以上的血清型【5】。在我国己发现200多个菌型。引起人类疾病的主要有猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、鸡沙门菌和鸭沙门菌等10多个血清型。检测方法1.国标方法GB/T4789.4-2010是我国目前规定的食品中沙门菌的标准检测方法。该检测方法主要是根据沙门菌的特性，分五个步骤进行，即前増菌

3、、选择性増菌、选择性平板分离、生化试验和血清学分型鉴定。该方法检测技术成木低，但检验程序复杂，耗时长，一般要4-7d才能得出准确的结果。针对此方法的缺点，有研究者对其进行了改良，比较常用有以下三种：1.1添加物质法由于沙门菌具有特异性地分解丙烯乙二醇产酸，使中性红指示剂变红的生化特性，在分离培养基中加入丙烯乙二醇，5-溴-4-氯-3為*

4、哚-D呋喃半乳糖，可对沙门菌的分离与鉴定同步进行，使沙门菌检测所需吋间从常规方法的4-7d缩短至2d【6】。1.2疏水网格滤膜法（HGMF）疏水网格滤膜法是利用滤膜的疏水性粘附细菌细胞，通过膜进行选择性地培

5、养，达到检测鉴定0的菌的作用。疏水网格滤膜法对传统检测方法中的常规平板划线做了改进。样品通过滤膜的过滤，浓缩了样品中的细菌，除去了多余的生长抑制物质，使0的菌粘附在疏水网格滤膜的小格中，在疏水网格滤膜上倾入沙门菌选择性培养基，培养后即可计数。该方法比国标法操作简化，检测时间可缩短至3d左右【7】。1.3显色培养法显色培养法是在培养基中加入沙门菌某些特异性酶的底物，该底物通常为无色，经特异性酶作用而显现一定的颜色，便于可疑沙门菌的识别【8】。显色培养法使用方便，操作简单，可大大缩短检测时间，能满足应急或基层单位检测的需要，但成本较高，很难普及

6、使用。1.免疫学检测法利用抗原抗体的反应特性，对细菌进行鉴别和定型。沙门菌免疫学检测方法大致可分为：酶联免疫吸附（EUSA）法、斑点酶联免疫吸附（Dot-EUSA）法、荧光抗体染色（免疫荧光）法、自动酶标免疫检测仪、免疫磁性分离法等。2.1酶联免疫吸附测定法（EUSA）Kryinski与Heimsch1977年首次将酶联免疫吸附测定法用于食品沙门菌检测。随后有许多学者都利用EUSA法进行食品沙门菌的检测，但他们使用的多价血清不同程度地存在交叉反应，使ELISA产生假阳性，在实际工作中造成一定的困难。20世纪80年代，.单克隆抗体技术问世并日

7、趋成熟，建立了沙门菌各种o抗原、H抗原的单抗，取代了常规因子血清进行血清学鉴定、伤寒诊断、鸡白痢检疫，并显示出单抗卓越的性能。王志亮等应用淋巴细胞杂交瘤技术获得了4株具有沙门菌广谱结合特性的单克隆抗体，其中2株的反应互补，对已检菌株覆盖率达99%,而对艽他受试肠杆菌均无交叉反应。文其乙等在前人的基础上应用沙门菌属特异性单克隆抗体CB8和de7建立了检测沙门菌的直接EUSA方法，并形成了快速检测试剂盒，它能检出肉类样品中至少5cfu/25g，并在48h内得出结果，最低检出量为106cfu/ml,特异性和灵敏性分别为100%和99%【9】。黄素

8、珍等采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价的3-47-26单克隆抗体，建立了检测肠炎沙门菌的抗原竞争EUSA方法，利用样品中的Lps抑制酶标抗体与包被的Lps结合，以降低底物反应的颜色，从而达到检测的0的【10-12】。通过单克隆抗体大大降低了假阳性率，使ELISA法得以在基层逐渐推广。2.2斑点酶联免疫吸附（Dot-ELISA）方法斑点酶联免疫吸附试验是以微孔滤膜为固相载体的一项免疫酶技术，具奋简单、快速、敏感、特异性强等特点，并具有较高的可重复性，比国标分离培养方法缩短3_4d，而且阳性反应色斑易于观察，阳性检出率也高于常规方法。应用该

9、方法检测食品中沙门菌的报道很多。蔡家利等应用Dot-ELISA检测屠宰加工肉品中沙门菌，与常规检测法对200份样品对比检验，该法检出结果符合率为96.65%【13-14】；张红见