大黄、蛰虫对药对子宫肌瘤模型大鼠erα、erβ及vegf的影响

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1、陕西中医学院2011届硕士学位论文第一章实验研究材料和方法1实验材料1.1实验动物72只体重150∼170g清洁级健康雌性SD大鼠，二级动物，于陕西中医学院中西医结合妇科重点学科实验室饲养；SPF级垫料、饲料均由第四军医大学动物实验中心提供。1.2实验药物大黄蛰虫对药：由陕西中医学院金秋门诊提供，经本院药剂科鉴定无伪劣品。大黄蛰虫丸：微丸，3g/袋，由成都永康制药有限公司生产，批准文号：Z-20044169。桂枝茯苓胶囊：0.31g/粒，由连云港康缘制药有限责任公司生产，编号：302005251。1.3实验试剂黄体酮注射液（20mg/ml）：由上海通用药业股份有限公

2、司生产苯甲酸雌二醇注射液（1mg/ml）：由上海第九制药厂生产胡姬花花生油（900ml）：由青岛嘉里植物油有限公司生产多聚甲醛（500g）：生产于SCRC国药集团化学试剂有限公司兔抗人、大、小鼠ERα多克隆抗体：购自北京博奥森生物技术有限公司兔抗人、大、小鼠ERβ多克隆抗体：购自北京博奥森生物技术有限公司兔抗人、大、小鼠VEGF抗体：购自北京博奥森生物技术有限公司SP-0023免疫组化染色试剂盒：购自北京博奥森生物技术有限公司DAB显色试剂盒：购自武汉博士德生物工程有限公司10%水合氯醛：由西交大医学院第二附属医院提供Na2HPO4·12H2O：由天津市科密欧化学试

3、剂有限公司提供NaH2PO4·2H20：由西安化学试剂厂提供Nacl：由天津市北方天医化学试剂厂提供C6H8O7·H2O：由天津市百世化工有限公司提供C6H5Na3O7·2H2O：由天津市百世化工有限公司提供2大黄、蛰虫对药对子宫肌瘤模型大鼠ERα、ERβ及VEGF的影响3%H2O2、4%多聚甲醛、0.01MPBS缓冲液、枸橼酸缓冲液：自配具体配制方法如下：3%双氧水（H2O2）配制：30%双氧水30ml加蒸馏水至300ml。4%多聚甲醛的配制：40g多聚甲醛与0.1mol/LPH7.2∼7.41000mlPBS混合后加热至60℃，搅拌并滴加1NNaOH至清凉为止。

4、0.01MPBS缓冲液（PH7.2∼7.4）配制：Na2HPO4·12H2O3g、NaH2PO4·2H2O29g、Nacl80g溶于1000Ml蒸馏水中，用NaOH调PH至7.2∼7.4，充分混匀后加蒸馏水至10000ml。1.01M枸橼酸缓冲液配制：枸橼酸钠3g、枸橼酸0.4g溶于1000ml蒸馏水中。2.4实验仪器手提式压力蒸汽灭菌器：由上海华线医用核子仪器有限公司提供ACS电子计价器：上海友声衡器有限公司制造架盘药物天平（HC·TP12A·1）：北京医用天平厂制造电子分析天平（SNR-1118062890）：瑞士制造一次性无菌注射器：由江西丰临医用器械有限公司

5、生产电热恒温干燥箱：由上海市红卫绒绣厂制造DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱：生产于上海一恒科技有限公司AO-800病理切片机：由上海医疗器械四厂制造XSZ-81光学显微镜：由广西梧州市光学仪器厂生成2实验方法3.1药剂制备大黄、蛰虫对药均经生药学鉴定，符合中国药典2005年版规定的质量标准。将大黄、蛰虫两味药物加水煎煮2次、每次2小时，过滤，药液混合浓缩至小、中、大剂量组分别含生药约0.15g/ml、0.29g/ml、0.58g/ml，4℃冰箱中保存备用。1.2雌、孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型2.2.1动物分组适应性饲养3天，保持室温18∼28℃，相对湿度

6、50%∼75%，自然通风光照，后随机分为7组：A组：正常对照组（10只）B组：模型对照组（12只）3陕西中医学院2011届硕士学位论文C组：大黄蛰虫对药小剂量组（10只）D组：大黄蛰虫对药中剂量组（10只）E组：大黄蛰虫对药大剂量组（10只）F组：大黄蛰虫丸组（10只）G组：桂枝茯苓胶囊组（10只）1.2.2给药方法A组：每周3次（一、三、五）肌肉注射花生油（高压灭菌）0.2ml/d，共20周。第11周起灌胃蒸馏水2ml/d，6次/周，连续10周。B组、C组、D组、E组、F组、G组均每周3次（一、三、五）肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/d,共20周。第14周起每周加

7、用黄体酮肌肉注射一次0.5mg/d,共7周。B组：于第10周末处死两只进行预实验。第11周给2ml/d蒸馏水灌胃，6次/周，连续10周。C组：第11周起予含生药0.15g/ml的大黄蛰虫对药悬液2ml/d灌胃，6次/周，连续10周。D组：第11周起予含生药0.29g/ml的大黄蛰虫对药悬液2ml/d灌胃，6次/周，连续10周。E组：第11周起予含生药0.58g/ml的大黄蛰虫对药悬液2ml/d灌胃，6次/周，连续10周。F组：第11周起予含生药0.07g/ml的大黄蛰虫丸悬液2ml/d灌胃，6次/周，连续10周。G组：第11周起予含生药0.04g/ml的桂枝茯苓