川中岛桃芽变系的srap分析

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1、川中岛桃芽变系的SRAP分析李海炎万保雄阳爱民梁瑞郑黄金盟广西特色作物研宄院/广西柑桔生物学重点实验室摘要：为从分子水平上区分“川中岛”桃Prunuspersica‘Kawanakajima’及其芽变，以川中岛桃及其芽变为材料，在分析其表型特征和观察物候期的基础上，采用SRAP分子标记技术，对其遗传稳定性进行了研究。结果表明，川屮岛及其芽变的主要表型差笄表现在成熟期提前等方而;选择25对引物进行PCR扩增，仅在2对引物中检测到3条多态性片段，说明川中岛及其芽变遗传物质没有发生较大变异，木研究中所得到的多态性片段

2、可能与物候期的结构基因有关，或者与这些基因的表达调控有关。关键词：“川中岛”桃;芽变;SRAP;作者简介：李海炎，女，硕士研究生，研究方向为果树遗传育种。E-mail:13949043327@163.com收稿日期：2017-06-13基金：现代农业产业技术体系建设专项（CARS-30）Received：2017-06-13“川中岛”桃是池田正之氏在自己日本川中岛白桃园中发现的一株优系，定名“选拔川中岛白桃”（引种后翻译成“优系川中岛白桃”）。于1998年9月11日，由日本友人桃山町农协参事松山先生赠送山东省平

3、度市。1998年引入中国,因综合性状较优，在屮国大面积栽培种植。2005年，笔者单位在川屮岛桃园屮发现一株早熟变异类型，其性状表现为花粉量大、丰产性能好、品质优、大果、早熟（较川中岛早熟15d），是一个优良芽变株系。2016年通过广西农作物品种审定委员会审定，命名为“桂桃一号”。果树芽变选种较杂交育种周期短，进程快，是果树育种重要方法之一。芽变选种主要是对果树主栽品种性状进行修饰，因而易获得优良品系m。DNA分子标记方法能直接反映遗传物质的改变，避免形态性状描述的缺陷，进行早期鉴定，是表型性状鉴定的重要补充。目

4、前已有RFLP、AFLP、RAPD等多种分子标记方法成用于果树品种鉴定［2-4］。SRAP标记（Sequence-relatedAmplifiedPolymorphism,序列和关扩增多态性）是美国加州大学Li和Quiros包1博士提出的一种DNA分子标记技术，该标记技术简便、快捷、结果稳定、多态性高m，已被广泛用于作物的基因定位、遗传图谱构建和生物多样性分析等研究领域［7-8］。本研宂利用SRAP分子标记在分子水平上鉴定芽变与对照间的差异，探索芽变与对照间的遗传关系，筛选两者间的多态性片段，为桃成熟期调控等研

5、究提供参考。1材料与方法1.1材料芽变材料:桂桃一号Prunuspcrsica‘GuiTao1llao’，2005年在川屮岛桃果园中发现该芽变，经广四特色作物研宄院连续多年对其进行遗传性鉴定、植物学特征、生物学特性调查和抗性观察等工作，发现桂桃一号与川中岛桃在形态学上存在显著差异，2016年8月通过广丙农作物品种审定委员会审定。对照为川中岛桃（P.persica‘Kawanakajima’，原产日本，已在我国大量栽培。2015年取回桂桃一号和川中岛桃幼嫩叶片，液氮冷冻后移至-80°C保存备用。1.2方法DNA的

6、提取采用CTAB法M提取叶片基因组DNA，用1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，用ddH2O稀释10倍，-20°C保存备用。引物的设计参照Quiros等X^lSRAP引物设计方法合成前引物Mel-Me20,后引物Eml-Em24进行随机组合,初选出25对引物进行试验。SRAP反应体系参照Quiros_^l、XiucaiFan［10］等的方法进行扩增。20yL体系中含模板DNA1pL,fprirae1PL,rprirae1PL,TaqMix10pL,ddH207uL置于PCR仪上按以下程序进行:94°C预变性5min

7、;94°CImin,35°Clmin,72°C1min5个循环；94°C1min,52°Clmin,72°Clmin35个循环；最后72°C延伸7min，4aC保存。PCR产物经1.5%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。SRAP电泳结果采取0/1赋值记带，在凝胶的相同迁移位置上出现条带的记为“1”，无带的记为“0”。2结果与分析2.1SRAP扩增位点差异分析用25对引物组合对川屮岛母株及其芽变叶片棊因组DNA进行初步筛选。结果看出，其中21对引物组合都有扩增条带，有84%的引物能扩增出清晰的条带，一般为2、条片段，介于l

8、OObp和500bp之间，大多数引物在芽变与对照间的扩增产物完全相同或相似。在有扩增条带的引物组合中，只有2对引物Mel7/Em5、Mel7/Em20在母株和变异株中扩增出广2条清晰稳定的差异条带，II差异条带仅在芽变中能得到特异扩增，而在川中岛中无扩增（见图1、表1）。2.2遗传相似性分析扩增结果若和对迂移距离和同为单态性片段，反之为多态性片段。试验结果看出,所筛选出的21对引物在芽