hplc法测定黔产钩藤中钩藤碱及异钩藤碱含量

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1、HPLC法测定黔产钩藤中钩藤碱及异钩藤碱含量【】目的：研究建立了黔产钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的含量测定方法。方法：采用HPLC法：KromosilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相以甲醇-0.2%氨水溶液(65：35)，流速：1.0mL·min-1，柱温：35℃；进样器温度：5℃；检测波长为245nm，结果：异钩藤碱和钩藤碱分别在0.13064～1.17576μg（r=1.0000）和0.09744～0.87696μg（r=0.9998）范围内呈良好的线性关系。异钩藤碱平均回收率（n=6）为98.88%，RSD为0.38％：钩藤碱平均回收率（n=6）为98.28%，RS

2、D为0.72％；结论：本检测方法快速、简便、灵敏、准确、可靠，重复性好，为黔产钩藤药材的质量控制提供了科学依据。　　【关键词】黔产钩藤；HPLC钩藤碱；异钩藤碱；含量测定　　贵州道地药材钩藤,为茜草科茜草属钩藤的干燥带钩枝茎。作为常用的中药材之一，具有清热平肝，熄风定惊的作用。主要用于头痛眩晕、感冒夹惊、惊痫抽搐、妊娠子痫，以及高血压等症。现代研究表明，钩藤的主要有效成分是总生物碱，其中以钩藤碱与异钩藤碱为主，具有降血压、抗心律失常以及抗血小板聚集和抗血栓形成的作用，目前，随着医药科技的发展，由于钩藤的深入开发研究，钩藤的功能效用在不断扩大，己越来越受到人们关注。由于钩藤的临床应用极为广泛，

3、现有较多的制剂使用钩藤作为主要原料药材。因此，利用钩藤制成的具有降血压、抗心律失常等治疗各种病症的复方制剂较多，如潜阳降压胶囊、天钩灵胶囊等，特别是进几年来利用钩藤提取制成的钩藤碱静脉注射液，具有抗脑血栓的作用。目前评价钩藤质量优劣的标准，多以钩藤碱和异钩藤碱的含量为指标。因此，我们采用合适、简便的方法提取钩藤中的钩藤碱与异钩藤碱，并采用快速、准确的RP-HPLC法测定其含量，有助于黔产钩藤药材的质量控制。　　1仪器与试药　　高效液相色谱仪；美国adulephotodiodeArroyDetebo高效液相自动进样及分离系统;poosilC18柱(4.6mnl×250mm，5m)，以甲醇-0.

4、2%氨水溶液(65：35)为流动相；流速：1.0mL·min-1；柱温：35℃：进样器温度：5℃；检测波长为245nm。钩藤碱及异钩藤碱的检测波长均为245nm；理论塔板数按钩藤碱和异钩藤碱，峰面积计算应不底于3000；进样量10。　　2.2对照品溶液的制备：精密称取钩藤碱和异钩藤碱对照品加甲醇制成每1mL含60μg和每1mL含80μg的混合溶液，即得。　　2.3供试品溶液的制备：取本品粉末(过3号筛)约0.3g，精密称定，加入氯仿:甲醇（5:1）的混合溶剂20mL，冰箱5℃放置过夜，加0.5mL氨水，低温超声40分钟，过滤，用氯仿:甲醇（5:1）的混合溶剂洗涤容器及滤渣，滤液置蒸发皿中，在

5、65℃水浴上挥干，残渣加甲醇定容置3mL容量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，既得。　　2.4线性关系考察：精密称取钩藤碱和异钩藤碱对照品适量加甲醇制成每1mL含0.05646mg·mL-1的钩藤碱溶液。和每1mL含0.083751mg·mL-1的异钩藤碱溶液。精密吸取上述混合对照品溶液2ul、6ul、10ul、14ul、18ul、按顺序进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，异钩藤碱和钩藤碱为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：异钩藤碱Y=2042275.6939X-1710.2281，r=1.0000结果表明异钩藤碱在0.13064~1.17576μg进样量与峰面积的线性关系良好。钩藤

6、碱Y=2466259.2365X13438.5000，r=0.9998结果表明钩藤碱在0.09744~0.87696μg进样量与峰面积的线性关系良好。　　2.5精密度实验：精密吸取同一浓度的混合对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，钩藤碱峰面积RSD为0.02%，精密度良好。异钩藤碱峰面积RSD为0.03%，密度良好。　　2.6稳定性实验：取供试品溶液，按0、2、4、8、12、24h进样，每次进样10μL，异钩藤碱峰面积RSD为0.30%，钩藤碱峰面积RSD为0.31%，表明样品在24小时内稳定。　　2.7重复性实验：取榕江钩藤药材粉末（过3号筛）约0.3g精密称定，按样品测定方法，平行制

7、备6份供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪测定，异钩藤碱含量平均值为0.06307%；RSD为0.31%。钩藤碱含量平均值为0.04345%；RSD为0.85%。重复性良好。　　2.8回收率考察实验：采用加样回收法，精密称取已知异钩藤碱质量分数为0.6307mg/g,钩藤碱质量分数为0.4345mg/g的样品6份，分别精密加入一定量的异钩藤碱和钩藤碱对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件测定,在