基质金属蛋白酶1、9基因多态性与成人脑星形细胞

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1、基质金属蛋白酶1、9基因多态性与成人脑星形细胞【】目的本研究旨在探索mmp1、mmp9基因启动子区单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,snps)与脑星形细胞瘤易感性的关系。方法以聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法，检测236例成人星形细胞瘤及366例健康对照的mmp116072g/1g及mmp91562c/t多态性的基因型。结果(1)mmp116072g/1gsnp等位基因型及基因型总体分布在星形细胞瘤患者组和健康对照组之间有显著性差异（p值分别为0.002和＜0.001）。与2g/2g基因型相比，1

2、g/1g基因型可显著降低该肿瘤的发病风险（校正or=0.58，95%ci=0.42～0.79），而2g/1g基因型对该肿瘤的易感性无显著影响（校正or=0.74，95%ci=0.51～1.08）。根据性别、发病年龄（≤45岁或＞45岁）进行的分层分析显示了相似的结果。(2)mmp91562c/t的等位基因型及基因型总体分布在肿瘤患者组和健康对照组之间差异无统计学意义（p值分别为0.926和0.818）。与c/c基因型相比，c/t+t/t基因型不能改变星形细胞瘤的发病风险（校正or=1.09，95%ci=0.73～1.64）。根据性别、发病年龄、病理分级进行的

3、分层分析，也未发现mmp9snp与星形细胞瘤的发病风险相关。结论mmp116072g/1g多态性与星形细胞瘤的易感性有关，而mmp91562c/t多态性可能不是该肿瘤的独立易感因素。.133229.【关键词】星形细胞瘤基质金属蛋白酶基因多态性脑胶质瘤（glioma）是最常见的原发性脑肿瘤，星形细胞瘤（astrocytoma）为其主要病理类型，其病因至今未明，有报道显示可能与接触大剂量放射性物质等因素有关[1]。最近研究提示，遗传基础可能为脑胶质瘤发生的重要因素，表现在：（1）部分脑胶质瘤存在家族聚集性[2]；（2）其发病与哮喘等变态反应疾病的发生成负相

4、关[3]；（3）一些基因多态性可能影响该肿瘤的发病风险[4,5]。研究显示，基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，mmps）基因启动子区的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,snps)可通过影响mrna转录或蛋白质表达水平而影响mmps的功能，从而影响肿瘤的发生、发展及预后。本课题组以往的研究表明，基质溶解素（mmp7）的181a/g多态与星形细胞瘤易感性增高有关，而间质溶素1（mmp3）11715a/6a多态与此肿瘤的易感性无关[6]。本研究进一步探讨了间质胶原酶（mmp1）1607

5、2g/1g和明胶酶b（mmp9）1562c/tsnp与星形细胞瘤易感性的关系。1资料与方法1.1研究对象236例成人脑星形细胞瘤病例为2004年1月～2006年1月在河北医科大学第二医院神经外科手术治疗的患者，术前未经过放、化治疗。其中包括l，经枸橼酸钠抗凝，于4℃冰箱保存，并于采血后1周内以蛋白酶k消化饱和氯化钠盐析法提取白细胞dna。取10～20片10μm厚的星形细胞瘤患者的石蜡包埋手术标本，经梯度酒精脱蜡后，以蛋白酶k消化、酚氯仿抽提法提取肿瘤组织dna。随机选取100例星形细胞瘤患者，同时抽取外周静脉血5ml并提取外周血白细胞dna。1.3mmp

6、1、mmp9基因分型mmps基因型检测应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（polymerasechainreactionrestrictionfragmentlengthpolymorphism，pcrrflp）方法进行。mmp116072g/1gsnp上下游扩增引物分别为5′tgacttttaaaacatagtctatgttca3′和5′tcttggattgatttgagataagtcatagc3′。人工将下游引物靠近3′末端的第二个碱基t为g所替代，从而产生一个aluⅰ（agct）限制性酶切位点。1g等位基因存在该识别位点，而2g

7、等位基因由于g的插入而无法被该酶识别。mmp91562c/tsnp上下游扩增引物分别为5′gcctggcacatagtaggccc3′和5′cttcctagccagccggcatc3′。人工将下游引物靠近3′末端的碱基c为t所替代，从而产生一个sphⅰ（gcacgc）限制性酶切位点。c等位基因存在该识别位点，而t等位基因则不能被该酶识别。pcr反应在pcr扩增仪（eppendorf公司，authorizedthermalcycler）中进行。反应体系均为25μl，其中模板dna100ng，10×pcr缓冲液2.5μl，taqdna聚合酶（博大泰克公

8、司）2.5u，mgcl2