壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量和cbfal基因表达影响研究

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1、壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量和Cbfαl基因表达影响的研究王力郑甦杨凤云邓运明王丽华熊兴勇(江西中医学院附属医院关节骨科，江西南昌330006)摘要：目的探讨壮骨续筋汤对大鼠成骨细胞功能态的影响方法采用含药血清的方法体外培养成骨细胞，分壮骨续筋汤组、对照组，观察各组碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfαl基因的表达；结果壮骨续筋汤组的碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfαl基因的表达强于对照组（P＜0.05）。结论壮骨续筋汤能促进成骨细胞功能态的发挥。关键词：壮骨续筋汤成骨细胞碱性磷酸酶比活性骨钙素Cbfαl基因【Abstract】

2、Objective:TostudytheeffectofZhuangguXutongrecipetothefunctionoftheSDrats，osteoblast.Methods:Accordingtothedrugcontainingserummethods,theosteoblastofSDratswerecultured.Theyweredividedrandomlyintotwogroups:ZhuangguXutongrecipegroupandcomparisongroup,thespecificactivityofalkalinityph

3、osphatase(ALP),thecontentsofboneglacontainingprotein(BGP)andtheexpressionofcorebindingfactorα1wereobservedineachgroup;Results:thespecificactivityofALP,thecontentsofboneglacontainingprotein(BGP)andtheexpressionofcorebindingfactorα1ofZhuangguXutongrecipegroupwerehigherthancomparison

4、group（P＜0.05）.Conclusion:ZhuangguXutongcanincreasethefunctionoftheSDrats，osteoblast.Keywords:ZhuangguXutongrecipeOsteoblastSpecificactivityofalkalinityphosphataseBoneglacontainingproteinCorebindingfactorα1体外培养细胞，有两种基本状态：即增殖态和功能态。功能态为细胞进行特定功能活动如分泌、传导、吞噬、收缩等的时期，是细胞的第二种生存状态。本研究以中药壮筋续

5、骨汤作为研究对象，采用中药血清药理学的方法体外培养成骨细胞，观察其对碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfal基因的表达等功能态的影响。1实验材料1.1仪器与试剂倒置相差显微镜（日本OLYMPUS）、CO2培养箱（德国Heraeus）;DU650紫外分光光度计(美国BECKMAN)；α－MEM(HyClone)、新生牛血清（NCS,HyClone）、青－链霉素溶液(HyClone)、HEPES(上海生工)、胰蛋白酶（1：250,AMRESCO）、β－甘油磷酸___________________________________________________

6、____________________________基金项目：江西省自然科学基金课题（课题编号：0640170）钠（β－GP,Sigma）、地塞米松(Sigma)、VitC(上海化学试剂公司)、碱性磷酸酶（ALP）和总蛋白试剂盒（南京建成生物工程研究所）、骨钙素(BGP)放免试剂盒（中国原子能科学研究所）、DU650紫外分光光度计(美国BECKMAN)；9600基因扩增仪(美国PE生物系统公司);GELDOC2000凝胶成像系统(美国BIORAD)；MILLI-QBiocel超纯水装置(美国MILLIPORE)；64R低温高速离心机(美国BECKMAN

7、)；TRIZOL试剂（华美）；Taq酶（上海生工）；反转录酶（上海生工）；引物（上海生工合成）等。1.2壮筋续骨汤的制备当归10g、菟丝子20g、西党20g、补骨脂20g、刘寄奴20g、川芎10g、白芍10g、杜仲10g、桂枝10g、三七10g、煅狗骨10g、木瓜310g、熟地40g、川断15g、五加皮15g、骨碎补30g、黄芪30g、蛰虫10g,上药加双蒸水8倍，浸泡2小时，煮沸1小时，收集药液，再加双蒸水6倍，煮沸1h，收集药液，再加双蒸水，煮沸1小时，合并三次药液，以3000r／min离心30min，取上清，4℃冰箱保存。1．3实验动物的购买及饲养S

8、D大鼠60只（清洁级30天龄），雌雄各半，每只体重280±20g，