大鼠肝细胞低氧预处理后蛋白质分子的二维电泳

《大鼠肝细胞低氧预处理后蛋白质分子的二维电泳》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、大鼠肝细胞低氧预处理后蛋白质分子的二维电泳【】目的利用二维电泳技术对大鼠肝细胞蛋白进行分离，以进一步探讨低氧预处理保护肝细胞的机制。方法将原代培养的肝细胞分成对照组和低氧预处理组，用固相化ph梯度等电聚焦的二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术展示并比较两组细胞表达的所有蛋白质，银染法显示两组细胞差异表达的蛋白质分子。结果两组肝细胞的蛋白质图谱分别可分辨出约260个蛋白点，绝大多数蛋白点在位置、大小和形状上几乎一致。对照组和预处理组间有11个明显差异的蛋白点，初步确定其等电点和分子量。其中5个蛋白质点仅在对照组中表达，而在预处理组中未出现；6个蛋白质点在预处理组

2、中表达，而在对照组中未出现。结论二维电泳可以对肝细胞蛋白进行较精确的分离；低氧预处理引起肝细胞蛋白质分子的改变，在预处理组中新增加的蛋白质分子可能与细胞耐受低氧有关。【关键词】肝细胞；低氧预处理；二维蛋白电泳；大鼠experimentalstudyonrathepatocytesproteinsafterhypoxicpreconditioningbytensionalgelelectrophoresischenentofgeneralsurgery，renjihospital，shanghaijiaotonguniversity，schoolofm

3、edicine，shanghai200127abstractobjectivetoanalyzerathepatocyteproteinsensionalgelelectrophoresisandtoprovideabasisforexploringthemechanismofhypoxicpreconditioningprotectinghepatocytesfromhypoxia/reoxygenationinjury.methodshepatocytesensionalgelelectrophoresis(2-de)mobilizedphgra

4、dients(ipg)toparethedifferentialexpressionofproteinsincontrolgrouphepatocytesandpreconditioninggrouphepatocytes.proteinsostofthemshooleculararily.these11proteinspotsensionalgelelectrophoresis.hypoxicpreconditioningcanchangeproteinexpressionsofrathepatocytes.neensionalgelelectro

5、phoresis；rats低氧预处理能提高肝细胞对低氧的耐受性，减轻再灌氧损伤，然而，我们仍不清楚低氧预处理后肝细胞内各种细胞因子的变化[1]。.133229.我们利用基因芯片技术研究低氧预处理后肝细胞基因表达谱的变化，发现低氧预处理对肝细胞的保护作用可能通过多个途径来实现[2]。因此，我们运用蛋白组分析技术，以获得正常肝细胞和低氧预处理后肝细胞的蛋白电泳图谱，并加以分析，以发现与低氧预处理相关的蛋白质分子，为今后从蛋白质水平上进一步研究低氧预处理保护肝细胞的机制打下基础。1材料与方法1.1实验材料粗制iv型胶原酶、碘代乙酰胺和temed（美国sig

6、ma公司）；95%n2-5%co2混合气体和95%o2-5%co2混合气体（上海比欧西气体公司）；尿素、甘氨酸和二硫苏糖醇（dtt）（美国biobasic公司）；chaps、pharmalyte3-10、ipg缓冲液，覆盖油和预制ipg胶条（ph3~10，线性）（瑞典amershampharmacia公司）；tris、十二烷基磺酸钠（sds）和过硫酸铵（美国amresco公司）；二维电泳蛋白标准品（美国bio-rad公司）。queue2711三气培养箱（美国parkersburg公司）；multiphoriielectrophoresissystem

7、（瑞典amershampharmacia公司）；proteantmii垂直电泳槽和pdquesttm2-d图像分析软件（美国bio-rad公司）。雄性sprague-dain，将沉淀混悬于50mlpbs中，50g离心2min，弃上清，反复3次，最后将沉淀混悬于rpmi-1640培养基，调整细胞密度为5.0×105/ml，接种于75cm2细胞培养瓶，每瓶15ml，在queue三气培养箱内（95%o2-5%co2，37℃）培养24h，使肝细胞达到稳定状态。2.1.2肝细胞分组和处理rpmi-1640细胞培养液在三气培养箱内分别和95%n2-5%co2混合

8、气体及95%o2-5%co2混合气体达到平衡，形成无氧培养液和富氧培养液。肝细胞培养24h后，分成二组：①对