内生真菌hly3中小檗碱的分离鉴定

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1、内生真菌HLY3中小檗碱的分离鉴定［摘要］选用PDA培养基对黄连内生真菌进行分离，运用薄层色谱法和高效液相色谱法检测到菌株HLY3可产小檗碱，菌丝中质量分数为9.313ug?g-l,形态学观察结合5.8SrDNAITS序列分析鉴定内生真菌HLY3为交链孢属Alternariasp.，采用薄层制备分离到小檗碱单体，质谱和核磁鉴定的结果表明小檗碱样品图谱与文献报道基本一致，确证分离到的生物碱为小檗碱，为小檗碱的开发利用提供了新的资源。［关键词］黄连；内生真菌；小檗碱；鉴定黄连属毛茛科黄连属多年生草本植物，主要分布在四川、贵州、湖南、湖北、陕西等地的山谷凉湿荫蔽密林中，由于黄连中主要

2、含有小檗碱，具有泻火燥湿、清热解毒之功效，在临床上应用广泛、需求量大，近几年出现了掠夺性采挖，导致野黄连数量逐年降低，少数种类濒临灭绝［1］。除人工种植黄连补充药源的不足外，探索小檗碱的新来源将是有益的尝试。研究表明，部分植物内生真菌具有与宿主产生相同活性物质的潜能［24］，因此，马庆等［5］从三角叶黄内生真菌HLY3中小檗碱的分离鉴定［摘要］选用PDA培养基对黄连内生真菌进行分离，运用薄层色谱法和高效液相色谱法检测到菌株HLY3可产小檗碱，菌丝中质量分数为9.313ug?g-l,形态学观察结合5.8SrDNAITS序列分析鉴定内生真菌HLY3为交链孢属Alternariasp

3、.，采用薄层制备分离到小檗碱单体，质谱和核磁鉴定的结果表明小檗碱样品图谱与文献报道基本一致，确证分离到的生物碱为小檗碱，为小檗碱的开发利用提供了新的资源。［关键词］黄连；内生真菌；小檗碱；鉴定黄连属毛茛科黄连属多年生草本植物，主要分布在四川、贵州、湖南、湖北、陕西等地的山谷凉湿荫蔽密林中，由于黄连中主要含有小檗碱，具有泻火燥湿、清热解毒之功效，在临床上应用广泛、需求量大，近几年出现了掠夺性采挖，导致野黄连数量逐年降低，少数种类濒临灭绝［1］。除人工种植黄连补充药源的不足外，探索小檗碱的新来源将是有益的尝试。研究表明，部分植物内生真菌具有与宿主产生相同活性物质的潜能［24］，因此

4、，马庆等［5］从三角叶黄内生真菌HLY3中小檗碱的分离鉴定［摘要］选用PDA培养基对黄连内生真菌进行分离，运用薄层色谱法和高效液相色谱法检测到菌株HLY3可产小檗碱，菌丝中质量分数为9.313ug?g-l,形态学观察结合5.8SrDNAITS序列分析鉴定内生真菌HLY3为交链孢属Alternariasp.，采用薄层制备分离到小檗碱单体，质谱和核磁鉴定的结果表明小檗碱样品图谱与文献报道基本一致，确证分离到的生物碱为小檗碱，为小檗碱的开发利用提供了新的资源。［关键词］黄连；内生真菌；小檗碱；鉴定黄连属毛茛科黄连属多年生草本植物，主要分布在四川、贵州、湖南、湖北、陕西等地的山谷凉湿荫

5、蔽密林中，由于黄连中主要含有小檗碱，具有泻火燥湿、清热解毒之功效，在临床上应用广泛、需求量大，近几年出现了掠夺性采挖，导致野黄连数量逐年降低，少数种类濒临灭绝［1］。除人工种植黄连补充药源的不足外，探索小檗碱的新来源将是有益的尝试。研究表明，部分植物内生真菌具有与宿主产生相同活性物质的潜能［24］，因此，马庆等［5］从三角叶黄连中筛选出了具有抑菌活性的内生真菌，厉秀秀等［6］从黄连中分离出了产小檗碱的内生真发现内生真菌发酵液中小檗碱的质量分数为0.664mg?L-lo本研宄在厉秀秀等的试验基础上，分离黄连内生真菌中的小檗碱，并用波谱技术进行鉴定。1材料与方法1.1仪器与试剂GN

6、P9080型恒温培养箱；美国Waters高效液相色谱仪，Water2489紫外检测器；MoticBA210生物显微镜；BioRadPTC150PCR扩增仪；BrukerAVANCEIII型核磁共振仪；ABSisexAPI2000型质谱仪；分析纯溶剂，成都市科龙化工试剂厂;色谱纯溶剂，天津科密欧化学试剂有限公司。药材黄连于2014年8月采自重庆市开县岩水乡倪家村农田，经西北农林科技大学生命科学学院李玉平副教授鉴定为CoptischinensisFranch。小檗碱对照品购自上海融禾医药科技发展有限公司(批号120227,纯度＞98%)，实验所用培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PD

7、A)[7]01.2内生真菌的分离纯化参照文献[8]及本实验室已建立的方法，将黄连用75%乙醇和4%次氯酸钠表面消毒，无菌水冲洗；用无菌滤纸片吸干水分，切成适当大小的组织块，置于PDA培养基上，22°匚避光培养。待组织块边缘有菌丝长出，经纯化培养后，以PDA固体斜面培养基4°C保存于本实验室。设置超净工作台无菌状态检测对照、漂洗液无菌检测对照和组织印迹无菌检测对照3种对照处理［9］，以保证所得菌株为植物内生真1.3菌丝提取液的制备和分析将内生真菌接种到PDA培养基上，22°C培养14d，用无菌